脂肪細(xì)胞因子對代謝綜合征血管內(nèi)皮細(xì)胞功能影響的研究——炎癥因子和脂聯(lián)素的相關(guān)研究.pdf

1、研究目的：胰島素抵抗是目前公認(rèn)的心血管疾病危險(xiǎn)因素，胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下的血管內(nèi)皮細(xì)胞功能異常是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。探索胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下內(nèi)皮細(xì)胞功能異常的發(fā)生機(jī)制，具有重要的理論意義和實(shí)用價(jià)值。研究發(fā)現(xiàn)脂肪源性炎癥因子在胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下血管內(nèi)皮細(xì)胞功能異常的發(fā)生機(jī)制中具有重要地位。因此，本研究以食物誘導(dǎo)性肥胖大鼠模型作為實(shí)驗(yàn)對象、大劑量阿司匹林作為干預(yù)手段，探討炎癥因子在胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下血管內(nèi)皮細(xì)胞功能異常中的作用及可能的機(jī)理。

2、 研究方法：100-150克左右3-4周齡健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常對照組(NC組)、肥胖組(0B組)和肥胖+阿司匹林干預(yù)組(0B-AS組)。NC組給予普通飼料喂養(yǎng)8周，OB組和0B-AS組給予高脂飼料喂養(yǎng)8周，OB-AS 組喂養(yǎng)的后4周給予阿司匹林干預(yù)。采用胰島素鉗夾技術(shù)評價(jià)外周胰島素敏感程度，測定內(nèi)皮源性NO水平的變化及內(nèi)皮依賴性血管舒張功能評價(jià)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能，測定循環(huán)中炎癥因子TNF-α和CRP的水平，免疫組化法和W

3、estern印跡法檢測血管組織中IKKβ-NF-kB分子通路的激活情況。 結(jié)果：與NC組比較，OB組炎癥因子TNF-α和CRP的水平升高(OB VS.NC：hsCRP：51.90±7.15 VS.15.86±5.07nmol／L：TNF-α：615.64±66.13 VS.281.37±44.53pg／ml，P<0.05)，Ach作用下的血管舒張反應(yīng)降低和N0產(chǎn)生減少(OB VS.NC：BFV：8.O±0.13vs.10.7±

4、0.67vs.12.1±0.39kHz；NO：42.68±1.88 VS.67.87±4.65vs.92.5±12.97umol／L.P<0.05)，血管組織NF-kBp65和IKK B的染色強(qiáng)度以及NF-kBp65的表達(dá)明顯增強(qiáng)(OB VS.NC：Western印跡0D(NF-kBp65)：0.63±0.08 VS.1.18±O.09，P<0.05)。而阿司匹林干預(yù)后的OB-AS組其炎癥因子水平較0B組下降(OB-AS VS.OB：C

5、RP：37.04±2.97vs.51.90±7.15nmol／L：TNF-α：460.64±48.71 VS.615.64±66.13pg／ml P<0.05)，Ach刺激后NO的增加更顯著，血管舒張更為明顯(BFV：10.7±O.67 VS.8.0±0.13Kilz．NO：67.87±4.65 VS.42.68±1.88 umol／L，P<0.05)。血管組織NF-k Bp65和IKKβ的染色強(qiáng)度以及NF-kBp65的表達(dá)水平較0B組

6、大鼠下降，(OB VS.OB-AS：Western印跡0D(NF-kBp65)1.18±O.09 VS.0.89±0.1，P<0.05)。 結(jié)論：阿司匹林使胰島素抵抗大鼠炎癥因子水平降低，血管組織IKK β-NF-kB分子通路活下降，同時(shí)使胰島素抵抗大鼠內(nèi)皮源性NO產(chǎn)生增加，內(nèi)皮依賴性血管舒張功能改善，因此炎癥因子可能參與到胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)其血管內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙的產(chǎn)生中，其對內(nèi)皮細(xì)胞的作用機(jī)制可能部分與激活經(jīng)典的IKK β-NF-

7、kB分子通路，抑制內(nèi)皮源性NO產(chǎn)生有關(guān)。 研究目的：脂聯(lián)素(Adiponctin)是新發(fā)現(xiàn)的一種脂肪細(xì)胞來源的激素蛋白，研究發(fā)現(xiàn)脂聯(lián)素能顯著改善胰島素抵抗、增強(qiáng)外周組織對胰島素的敏感性、改善胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下的血管內(nèi)皮細(xì)胞功能，尤其是脂聯(lián)素的球型結(jié)構(gòu)域(gloubal domain of adiponectin，gAd)。為了研究脂聯(lián)素主要是脂聯(lián)素球型結(jié)構(gòu)域的功能，本研究體外克隆表達(dá)人脂聯(lián)素基因球型結(jié)構(gòu)域，為進(jìn)一步功能提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)

8、 研究方法：應(yīng)用RT-PCR方法從中國人大網(wǎng)膜脂肪組織總RNA中擴(kuò)增出gAd cDNA，克隆入載體pMD18-T、pET32a(+)中，形成重組質(zhì)粒gAd-pET32a(+)。篩選出陽性克隆，通過限制性內(nèi)切酶酶切、PCR鑒定后對其進(jìn)行測序，并在體外進(jìn)行小量表達(dá)。 結(jié)果：從脂肪組織總RNA中擴(kuò)增得到412bp片段gad基因，其eDNA序列與GenBank人gad基因序列相同，并在體外表達(dá)得到分子量約為34KD的重組蛋白。