白介素-6、白藜蘆醇對肺泡上皮細胞A549增殖的影響.pdf

1、目的：研究白介素-6(interleukin-6，IL-6)、白藜蘆醇(resveratrol，Res)對肺泡上皮細胞A549增殖的影響，觀察其對內(nèi)毒素(endotoxin，LPS)誘導的A549細胞損傷中的干預作用。探討白藜蘆醇誘導A549細胞凋亡的機制，并構(gòu)建A549細胞白介素-6 RNA干擾模型。 方法：本實驗通過A549細胞培養(yǎng)，按預設(shè)方案添加白介素．6、白藜蘆醇、內(nèi)毒素處理細胞樣品；采用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法(

2、MTT法)檢測A549細胞的增殖效應及不同藥物對其增殖效應的影響；運用TUNEL染色檢測白藜蘆醇誘導的A549細胞凋亡；運用蛋白免疫印跡技術(shù)(Western blotting)檢測A549細胞凋亡相關(guān)蛋白的表達變化；化學合成法合成白介素-6 SiRNA，通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染干擾A549細胞白介素-6的表達；運用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶聯(lián)反應(RT-PCR)檢測A549細胞內(nèi)IL-6的表達及LPS刺激后的變化。 結(jié)果： 1．內(nèi)毒素能損傷體外

3、培養(yǎng)的A549細胞，其作用具有明顯的時間、濃度依賴性；外源性白介素-6對內(nèi)毒素誘導的A549細胞損傷的干預作用不明顯。 2．白藜蘆醇對內(nèi)毒素誘導的A549細胞損傷的干預作用不明顯。白藜蘆醇對A549細胞的增殖具有明顯的抑制作用，這種作用具有明顯的時間、濃度依賴性。白藜蘆醇對A549細胞的增殖抑制作用部分是通過誘導A549細胞凋亡而實現(xiàn)的。白藜蘆醇誘導A549細胞凋亡可能是通過抑制Akt的表達及其磷酸化，從而調(diào)節(jié)線粒體凋亡途徑相關(guān)

4、蛋白的表達而實現(xiàn)的，其對死亡受體途徑的相關(guān)蛋白影響不明顯。 3．體外培養(yǎng)的A549細胞存在白介素-6基因的表達，內(nèi)毒素刺激A549細胞能導致其表達量的變化，通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的白介素-6 SiRNA能干擾A549細胞中白介素-6的表達。 結(jié)論： 外源性的白介素-6和白藜蘆醇對內(nèi)毒素誘導的A549細胞損傷的干預作用不明顯；白藜蘆醇對A549細胞存在明顯的增殖抑制作用，能夠通過調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白的表達誘導A549細胞凋亡；