香煙煙霧對(duì)大鼠肺組織及Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞親環(huán)素A表達(dá)的影響.pdf

1、【目的】：
　　初步研究親環(huán)素A(CyclophilinA,CypA)在被動(dòng)吸煙大鼠肺組織中的表達(dá)；以及在香煙煙霧提取物處理的大鼠II型肺泡上皮細(xì)胞（AECII）內(nèi)的表達(dá)及其與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激性凋亡（ERSIA）的關(guān)系。
　　【方法】：
　　本研究分為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分以及體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)部分：
　　1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分：40只SD-大鼠分為對(duì)照組、被動(dòng)吸煙2個(gè)月組（2個(gè)月組）、被動(dòng)吸煙4個(gè)月組（4個(gè)月組）、被動(dòng)吸煙4個(gè)月后停止吸煙

2、1個(gè)月組（戒煙組），檢測各組大鼠肺功能，提取各組大鼠肺組織標(biāo)本，用HE染色法檢測造模情況，分別采用反轉(zhuǎn)錄-PCR（RT-PCR）、Western blot、免疫組織化學(xué)（IHC）方法檢測CypA的表達(dá)。
　　2.體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)部分：體外培養(yǎng) AECII；制備10％的CSE；用 CSE分別處理AECII0h、3h、6h、12h、24h；采用RT-PCR、Western blot、細(xì)胞免疫熒光染色方法檢測CypA、Caspase12、J

3、NK、P-JNK、CHOP的表達(dá)。
　　【結(jié)果】：
　　1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分
　?。?）大鼠肺組織病理學(xué)結(jié)果顯示:2個(gè)月組與對(duì)照組相比肺泡腔有所擴(kuò)大，肺泡結(jié)構(gòu)破壞，肺泡間質(zhì)有斷裂，4個(gè)月組肺泡腔擴(kuò)大更明顯，肺泡壁變薄，肺泡結(jié)構(gòu)嚴(yán)重?cái)嗔?，戒煙組與4個(gè)月組差異不明顯。
　?。?）Western blot結(jié)果顯示：CypA在對(duì)照組、吸煙2個(gè)月組、4個(gè)月組、戒煙組的蛋白表達(dá)量分別為：0.63±0.02、1.02±0.27、1

4、.32±0.16、0.84±0.01。吸煙4個(gè)月組大鼠肺組織中表達(dá)最高，其次是吸煙2個(gè)月組、戒煙組，表達(dá)最低的為正常對(duì)照組大鼠肺組織。RT-PCR、IHC結(jié)果與Western blot結(jié)果一致。
　　2.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)部分
　　（1）RT-PCR結(jié)果顯示：CypA在0h、3h、6h、12h、24h的mRNA表達(dá)量分別為：0.64±0.24、0.86±0.01、0.88±0.09、1.11±0.09、1.02±0.01。隨著CSE作

5、用時(shí)間的延長， CypA的表達(dá)呈現(xiàn)一個(gè)遞增的趨勢，在12H表達(dá)最高。
　　（2）Westernblot結(jié)果顯示:CypA在0h、3h、6h、12h、24h的蛋白表達(dá)量分別為：0.08±0.02、0.15±0.03、0.24±0.03、0.31±0.02、0.46±0.03。隨著CSE作用時(shí)間延長CypA蛋白的表達(dá)呈現(xiàn)遞增趨勢，于24H表達(dá)最高?？侸NK、P-JNK、Caspase12、CHOP在0h、3h、6h、12h、24h的蛋

6、白表達(dá)量分別為1.52±0.22、1.13±0.24、1.50±0.21、1.21±0.55、1.04±0.24；0.16±0.05、0.29±0.03、0.38±0.03、0.48±0.06、0.69±0.01；0.12±0.05、0.25±0.04、0.39±0.02、0.58±0.05、0.49±0.02；0.00、0.35±0.09、0.48±0.04、0.66±0.06、0.81±0.08。在總JNK的表達(dá)與對(duì)照組相比，10％