白藜蘆醇對培養(yǎng)的人黑素細胞的影響.pdf

1、目的：研究RES對ET-1介導的黑素細胞黑素合成的影響及其相關機制，并探討其對黑素細胞的細胞毒性作用，為RES作為一種新型、安全和高效的皮膚美白祛斑物質提供一定的理論基礎和實驗依據(jù)。
　　 方法：①建立不含佛波醇酯（TPA）和霍亂毒素（CT）體外培養(yǎng)正常人黑素細胞的方法：以避免TPA和CT改變黑素細胞的生物學特性，為后續(xù)的實驗提供可靠的黑素細胞來源。②研究ET-1對培養(yǎng)的人黑素細胞生物學特性的影響：探討ET-1 對體外培養(yǎng)的正常

2、人黑素細胞形態(tài)、增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成的影響，并尋找一個最有效的調控濃度，為后續(xù)的實驗提供實驗基礎。③RES對人黑素細胞的細胞毒性分析：以探討RES 應用于美白祛斑治療的安全性，并尋找出其安全濃度范圍，為其臨床應用提供實驗依據(jù)。④ 探討RES對ET-1 介導的黑素合成的影響及其相關機制：以探討RES 應用于美白祛斑治療的有效性，并研究其相關機制，為其臨床應用提供實驗依據(jù)。
　　 結果：⑴在第一項實驗研究中，我們取了青少年包

3、皮環(huán)切術后包皮組織6 例，年齡6-11 歲，平均8 歲，用不含TPA 和CT 的角質形成細胞無血清培養(yǎng)基（KC-SFM）培養(yǎng)、用差速貼壁法及胰酶差速消化法去除角質形成細胞、用兩段法去除成纖維細胞，所培養(yǎng)出的細胞經(jīng)多巴染色和抗S-100、抗HMB45 蛋白抗體免疫細胞化學染色均呈陽性反應，證實為黑素細胞，從而建立了不含TPA 和CT 體外培養(yǎng)正常人黑素細胞的方法，該方法穩(wěn)定、可靠。⑵在第二項實驗研究中，我們取了青少年包皮環(huán)切術后包皮組織6

4、 例，年齡6-15歲，平均11歲，分別用倒置顯微鏡觀察、CCK-8 法、多巴氧化法和NaOH 法測定了ET-1對黑素細胞形態(tài)、增殖、酪氨酸酶活性和黑素含量的影響。該項實驗結果提示：一定濃度的ET-1 可有效地促進培養(yǎng)的正常人黑素細胞的增殖和樹突形成，上調酪氨酸酶活性和增加黑素含量，10nM 的ET-1不僅能促進黑素細胞增殖及酪氨酸酶活性，而且此濃度下的黑素含量水平最高，因此10nM是最有效的調控濃度。⑶在分析RES對人黑素細胞的細胞毒性

5、作用時，取青少年包皮環(huán)切術后包皮組織3例，年齡6-12歲，平均10歲，用CCK-8法測定黑素細胞的增殖抑制率，Annexin V/PI雙染色法流式細胞儀檢測黑素細胞的凋亡率。該項實驗結果顯示，10μM 濃度以下的RES 對人黑素細胞無增殖抑制作用也無凋亡促進作用。⑷在研究RES對ET-1介導的黑素合成的影響及其相關機制中，取青少年包皮環(huán)切術后包皮組織9 例，年齡6-15歲，平均12歲，采用NaOH法測定黑素含量，多巴氧化法測定黑素細胞的

6、酪氨酸酶活性，半定量RT-PCR法測定酪氨酸酶mRNA和TRP-1 mRNA表達水平。我們的實驗結果提示：0.1~10μM的RES 可抑制ET-1 介導的黑素合成，其主要機制可能是通過抑制酪氨酸酶活性起作用，而與酪氨酸酶mRNA 和TRP-1mRNA 的表達無關。
　　 結論：RES可作為一種內皮素拮抗劑，可以通過抑制酪氨酸酶活性減少黑素合成，且在10μM濃度以下時無細胞毒性作用。因此，RES可作為一種皮膚美白物質，其安全、有效