miR-146a在脂多糖誘導肺泡巨噬細胞中的動態(tài)表達及與TNF-a的相關(guān)性分析.pdf

1、目的:
　　 觀察miR-146a和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)在脂多糖(LPS)誘導的肺泡巨噬細胞中的動態(tài)表達,分析兩者在時間上的變化關(guān)系,探討miR-146a對肺泡巨噬細胞炎癥反應(yīng)的調(diào)控作用及其機制。
　　 方法:
　　 將體外培養(yǎng)的NR8383肺泡巨噬細胞按1×106個/mL接種于六孔板,貼壁90min后加入1μg/mL的LPS,刺激0h、3h、6h、12h后離心收集培養(yǎng)上清液和細胞團塊。采用實時熒光定量

2、PCR(RT-qPCR)檢測細胞中miR-146a和TNF-αmRNA的表達情況,酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測培養(yǎng)上清液中TNF-α蛋白水平的表達。miR-146a和TNF-αmRNA的相關(guān)性采用雙變量Pearson相關(guān)性分析。
　　 結(jié)果:
　　 1.LPS刺激6h后,細胞中的miR-146a表達水平開始增高(5.33±0.81倍,P<0.01),并且持續(xù)增高(12h:8.21±1.19倍,P<0.01)；

3、>　　 2.LPS刺激3h后,細胞中TNF-α mRNA的表達即達到頂峰(67.48±24.52倍,P<0.01),6h后開始降低(29.53±4.26倍,P<0.05)；
　　 3.培養(yǎng)上清液中的TNF-α蛋白在LPS刺激3h后即升高(359.80±57.54pg/mL,P<0.01),于12h達高峰(729.22±50.40pg/mL,P<0.01)；
　　 4.細胞中miR-146a的表達水平與TNF-α mRN