miR-146a在喉癌中的表達(dá)及其與BRMS1相關(guān)性的研究.pdf

1、[目的]
　　本研究旨在探討miR-146a在喉癌中的表達(dá)情況，以及驗(yàn)證喉癌中BRMS1和miR-146a的表達(dá)相關(guān)性并闡明其作用機(jī)制。
　　[方法]
　　收集廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2013年12月至2014年12月手術(shù)切除的喉癌組織標(biāo)本，完善病例臨床資料，所有患者在手術(shù)前均未經(jīng)歷放療和化療。腫瘤組織取自標(biāo)本的中央部分，去除表面壞死組織和粘液;癌旁正常組織取自手術(shù)切緣（癌旁2cm以上）的邊緣黏膜，去除黏膜下層組織只保留麟狀

2、上皮。
　　提取27例喉癌組織、15例癌旁正常喉粘膜組織中的總RNA，逆轉(zhuǎn)錄并用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測其miR-146a的表達(dá)，western blotting檢測喉癌組織及癌旁非腫瘤組織中BRMS1蛋白的表達(dá)。siRNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染BRMS1至hep-2細(xì)胞，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測轉(zhuǎn)染效率，同時(shí)對比轉(zhuǎn)染前后miR-146a的表達(dá)變化情況，CCK8與流式細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測轉(zhuǎn)染后喉癌細(xì)胞的增殖與凋亡能力變化以及細(xì)胞周期阻滯的情況。
　

3、　[結(jié)果]
　　1.實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)結(jié)果證實(shí)miR-146a在喉癌組織中表達(dá)水平與癌旁非腫瘤組織相比明顯升高。
　　2.western bloting結(jié)果顯示BRMS1在喉癌組織中呈低表達(dá)或不表達(dá)。
　　3.Hep-2細(xì)胞中BRMS1表達(dá)抑制后，miR-146a表達(dá)水平升高。
　　4.CCK8及流式細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示喉癌細(xì)胞中BRMS1表達(dá)抑制后，其增殖和凋亡能力并無改變，但細(xì)胞周期出現(xiàn)G2/

4、M期阻滯。
　　[結(jié)論]
　　1.miR-146a在喉癌組織中表達(dá)水平明顯高于癌旁非腫瘤組織，提示miR-146a可能作為喉癌的促腫瘤因素而參與到喉癌的發(fā)生、發(fā)展中。
　　2.在喉癌不同性別、年齡、TNM分期、原發(fā)部位、是否有吸煙史等不同因素的分組中，miR-146a的表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示miR-146a可能與喉癌的臨床病理參數(shù)之間并無相關(guān)性，但是也不能完全排除取材例數(shù)有限導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)誤差。
　　3.BRM

5、S1基因在喉癌組織中呈低表達(dá)或不表達(dá)，提示BRMS1可能作為抑癌基因參與喉癌的發(fā)生、發(fā)展等生物學(xué)進(jìn)程。
　　4.BRMS1的表達(dá)抑制后，hep-2細(xì)胞的增殖與凋亡率未發(fā)生改變，但是細(xì)胞周期出現(xiàn)G2/M期阻滯，提示BRMS1并不影響hep-2細(xì)胞的增殖與凋亡，BRMS1的表達(dá)異?？赡茉黾恿四承┪粗虻耐蛔冾l率致使腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力增加。
　　5.在hep-2細(xì)胞中抑制BRMS1的表達(dá)后，miR-146a表達(dá)水平升高，提