乳腺癌細胞中miR-146a表達調控的表觀遺傳學機制.pdf

1、部分miRNAs可以通過抑制癌基因的表達，發(fā)揮腫瘤抑制基因的作用，在腫瘤惡性進程中，常伴隨這部分miRNAs基因沉默失活。HDAC作為輔阻遏物參與形成轉錄因子復合體，介導腫瘤抑制基因沉默失活導致腫瘤發(fā)生，用HDACi抑制HDAC活性，能重新激活沉默基因的表達。
　　用HDACiTSA作用于乳腺癌SK-BR-3細胞后，檢測到7個miRNAs表達升高，5個miRNAs表達降低；其中miR-146a，在TSA作用前處于沉默狀態(tài)，檢測不到

2、其表達，在TSA作用后表達升高。通過在細胞中過表達miR-146a，驗證了它可以靶向CXCR43`-UTR，通過抑制翻譯來降低其表達，從而降低SDF-1趨化的腫瘤細胞侵襲，并抑制腫瘤細胞生長、增殖，確立了miR-146a作為腫瘤抑制基因的地位。
　　為了研究miR-146a基因表達調控機制，用5`-RACE實驗確定了miR-146a基因轉錄起始位點，用于分析其啟動子區(qū)調節(jié)因子結合狀態(tài)。通過染色質免疫共沉淀實驗證實，組蛋白H3K56

3、乙?；图せ罨虮磉_緊密相關，不加TSA刺激時，幾乎檢測不到miR-146a基因啟動子區(qū)組蛋白H3K56乙?；?，伴隨基因沉默；給予TSA刺激時，啟動子區(qū)組蛋白H3K56乙?；斤@著升高，伴隨激活基因表達。
　　進一步的實驗證實，CBP和P300是組蛋白H3K56乙?；D移酶，作為輔激動蛋白參與激活miR-146a基因表達；HDAC1是組蛋白H3K56去乙酰化酶，作為輔阻遏物導致miR-146a基因沉默。TSA作用于細胞，能抑制H

4、DAC1活性，HDAC1作為輔阻遏物的作用被解除，miR-146a基因啟動子區(qū)募集了更多的輔激動蛋白CBP和P300，后者介導了啟動子區(qū)組蛋白H3K56乙酰化，伴隨PolⅡ結合到啟動子區(qū)，啟動基因轉錄，從而揭示了表觀遺傳學因素參與調節(jié)miR-146a基因表達的機制。
　　不同腫瘤細胞中，存在miR-146a基因表觀遺傳學調控多樣性，在觀察的乳腺癌，胃癌，肝癌，肺癌，卵巢癌和子宮內膜癌細胞中，單獨使用TSA或者聯(lián)合使用去甲基化藥物5