miR-191在人乳腺癌中的表達(dá)及其對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖、侵襲的影響.pdf

1、[背景]
　　miRNAs是一種分子量較小，無法編碼蛋白的內(nèi)源性RNA,通過與其靶基因mRNA上的堿基互補(bǔ)結(jié)合，降解靶基因mRNA或阻礙靶基因mRNA的翻譯過程，來發(fā)揮其轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的作用。作為miRNAs家族中的一員，miR-191涉及許多腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移等過程，但有關(guān)其在乳腺癌方面的表達(dá)以及對(duì)乳腺癌的生物學(xué)行為的影響的研究目前尚未有過多的報(bào)告。激素受體狀態(tài)是指雌激素受體及孕激素受體的表達(dá)狀態(tài)，其在乳腺癌中的表達(dá)狀態(tài)會(huì)影響乳

2、腺癌的預(yù)后及治療等方面。PLCD1是已經(jīng)明確的一種抑癌基因，對(duì)癌細(xì)胞的生長和侵襲都有抑制作用，其表達(dá)缺失或下調(diào)會(huì)促進(jìn)癌細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)移等過程，而許多研究都發(fā)現(xiàn)PLCD1可能為miR-191的靶點(diǎn)基因，其表達(dá)可能受到miR-191表達(dá)的影響。為明確miR-191在人乳腺癌細(xì)胞及正常乳腺上皮細(xì)胞之間的表達(dá)狀態(tài)及其對(duì)乳腺癌細(xì)胞生物行為的影響，我們選取了激素受體狀態(tài)不同的乳腺癌細(xì)胞株及正常上皮乳腺癌細(xì)胞株，檢測(cè)其表達(dá)是否有差異，篩選出高表達(dá)的細(xì)胞

3、株，并利用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染手段干擾其miR-191的表達(dá)，進(jìn)一步研究miR-191對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖、侵襲的影響及對(duì)其可能的靶基因PLCD1表達(dá)的影響。
　　[目的]
　　檢測(cè)miR-191在人乳腺癌和正常乳腺上皮細(xì)胞之間的表達(dá)水平差異，探究其對(duì)乳腺癌細(xì)胞的增殖、侵襲影響，研究其對(duì)靶基因PLCD1表達(dá)的影響。初步分析miR-191在乳腺癌中表達(dá)情況及其在乳腺癌中的作用，為乳腺癌的診斷提供可能的腫瘤標(biāo)記物，為其治療提供可能的靶點(diǎn)。

4、>　　[方法]
　　1)選取人乳腺癌細(xì)胞[MDA-MB-231株（雌激素受體陰性，ER-）、MCF-7（雌激素受體陽性，ER+）]和正常乳腺上皮細(xì)胞株（HBL-100），用real-time PCR法檢測(cè)三種細(xì)胞株中miR-191表達(dá)水平的差異
　　2)利用Lipofectamine2000將miR-191inhibitor瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至人乳腺癌MCF-7細(xì)胞株中，并用real-time PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染效果和miR-191的表達(dá)

5、情況；
　　3)利用CCK-8法檢測(cè)轉(zhuǎn)染miR-191inhibitor后MCF-7細(xì)胞的增殖能力;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染miR-191inhibitor后MCF-7細(xì)胞的細(xì)胞周期變化;Transwell法檢測(cè)轉(zhuǎn)染miR-191inhibitor后MCF-7的侵襲能力。
　　4）Real-time PCR和Western blot法檢轉(zhuǎn)染miR-191 inhibitor及mi mics后各組細(xì)胞PLCD1的mRNA和蛋白的表達(dá)

6、。
　　[結(jié)果]
　　1）miR-191在乳腺癌細(xì)胞（MCF-7，MDA-MB-231）中的表達(dá)水平明顯高于正常乳腺上皮細(xì)胞(HBL-100)[P<0.01]，并且在ER(+)的乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)中表達(dá)水平高于ER(-)乳腺癌細(xì)胞(MDA-MB-231)[P<0.01];
　　2)轉(zhuǎn)染miR-191 inhibitor后，與空白對(duì)照組相比，miR-191表達(dá)水平明顯下調(diào)，表明成功沉默miR-191的表達(dá)；

7、　　3）轉(zhuǎn)染miR-191 inhibitor后，MCF-7細(xì)胞增殖能力(0.65±0.04)較陰性對(duì)照組(1.18±0.05)明顯受到抑制（F=122.238，P<0.01），侵襲能力(56.67±2.58)較陰性對(duì)照組(82.5±5.79)減弱（F=18.734，P<0.01），G0/G1期的細(xì)胞比例(73.39±1.10)％較陰性對(duì)照組(69.28±2.11)%增加（F=61.060，P<0.01），S期細(xì)胞比例(20.9±1.1

8、7)%較陰性對(duì)照組(25.48±1.19)%減少（F=46.937，P<0.01）。
　　4）Real-time PCR及western blot檢測(cè)結(jié)果示：PLCD1在mRNA及蛋白水平表達(dá)隨miR-191表達(dá)上調(diào)而下降，隨miR-191表達(dá)下調(diào)而升高。
　　[結(jié)論]
　　miR-191在人乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)高于正常上皮細(xì)胞，且在ER（+）乳腺癌細(xì)胞中高表達(dá)高于ER(-)乳腺癌細(xì)胞；轉(zhuǎn)染miR-191抑制體后，MCF