人乳腺癌細(xì)胞株miRNAs的差異表達(dá)譜及hsa-miR-340對乳腺癌細(xì)胞侵襲力的影響.pdf

1、背景：MicroRNAs (miRNAs or miRs)是一類保守的由18-24個(gè)核苷酸組成的非編碼蛋白的單鏈RNA。MiRNAs被看作是一類特殊的基因調(diào)節(jié)因子，通過在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)基因的表達(dá)而在生物的組織器官發(fā)育、脂肪代謝、細(xì)胞分化、增殖和凋亡等過程中發(fā)揮重要作用。近年來陸續(xù)發(fā)現(xiàn)，一些miRNAs參與了人類乳腺癌的癌形成、癌演進(jìn)以及轉(zhuǎn)移過程。雖然已有較多研究報(bào)道各種miRNAs在人類癌癥中的異常改變，但是它們的生物學(xué)功能還沒有完全被

2、人們所了解。
　　 目的：檢測不同侵襲力人乳腺癌細(xì)胞株中miRNAs的表達(dá)情況，篩選出與乳腺癌細(xì)胞侵襲行為相關(guān)的miRNAs；初步探討miR-340對乳腺癌細(xì)胞侵襲力的影響，預(yù)測miR-340的靶基因。
　　 方法：⑴應(yīng)用miRNAs表達(dá)譜芯片檢測低侵襲力人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和高侵襲力人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231中具有表達(dá)差異的miRNAs。⑵挑選具有顯著表達(dá)差異的miR-340作為進(jìn)一步研究對象，采用QRT-

3、PCR方法驗(yàn)證其在高侵襲力人乳腺癌細(xì)胞株 (MDA-MB-231和MDA-MB-468)和低侵襲力人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7中的表達(dá)差異。⑶利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將化學(xué)合成的miR-340阻遏物 (miR-340 inhibitors) 轉(zhuǎn)染至人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7中，通過CCK-8法檢測細(xì)胞轉(zhuǎn)染前后增殖活性變化，用Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞侵襲力改變。⑷利用生物信息學(xué)手段，對miR-340進(jìn)行靶基因預(yù)測。
　　 結(jié)

4、果：①M(fèi)iRNAs芯片結(jié)果顯示，在二種不同侵襲力人乳腺癌細(xì)胞株中篩選獲得112種差異表達(dá)的miRNAs。其中，有34種為顯著差異表達(dá)的miRNAs。與MDA-MB-231細(xì)胞相比，在MCF-7細(xì)胞中表達(dá)顯著上調(diào)的有has-miR-340、miR-335、miR-126等14個(gè)miRNAs，顯著下調(diào)的有has-miR-186、has-miR-125b-1*等20個(gè)miRNAs。②QRT-PCR反應(yīng)結(jié)果顯示，與高侵襲力人乳腺癌細(xì)胞株MDA-

5、MB-231和MDA-MB-468相比，miR-340在低侵襲力人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7中的表達(dá)顯著上調(diào) (P<0.05)。③轉(zhuǎn)染miR-340阻遏物后，乳腺癌細(xì)胞的侵襲能力較轉(zhuǎn)染前明顯增強(qiáng) (P<0.05)，而體外增殖能力無明顯變化 (P>0.05)。④生物信息學(xué)手段預(yù)測結(jié)果顯示，包括CTNNB，ZNF403，CCPG1等基因在內(nèi)的數(shù)十種基因可能是miR-340的靶基因。
　　 結(jié)論：⑴不同侵襲力乳腺癌細(xì)胞株中存在多種miRN