NDRG2在乳腺癌組織中的表達(dá)及其對乳腺癌細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、人NDRG2基因(N-mycdownstreamregulatedgene2)是1999年從正常成人全腦文庫中最先發(fā)現(xiàn)并克隆得到。其定位于14q11.2，含有16個外顯子，15個內(nèi)含子，mRNA全長為2,024bp，編碼含有357個氨基酸殘基，蛋白質(zhì)分子量約40KD。NDRG基因家族中最先被發(fā)現(xiàn)的是NDRG1，是在研究N-myc下游調(diào)節(jié)基因時(shí)從小鼠胚胎中發(fā)現(xiàn)的。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)的人NDRG基因家族成員有4個：NDRG1,NDRG2,NDRG3和

2、NDRG4，它們之間具有較高的同源性，但其表達(dá)水平在組織發(fā)育階段和分布上存在明顯差異。
　　目前對NDRG基因家族功能了解主要來源于NDRG1的研究，已發(fā)現(xiàn)上調(diào)NDRG1的因素有：同型半胱氨酸、細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)（缺氧，Ni2+,各種還原劑）、視黃酸、p53等。綜合已有文獻(xiàn)，推測NDRG基因家族可能參與細(xì)胞生長分化，維持細(xì)胞氧化還原電勢平衡，阻止腫瘤細(xì)胞惡化等。
　　前期研究工作表明，NDRG2基因在多種組織中均有表達(dá)，而以中

3、樞神經(jīng)系統(tǒng)的大腦皮質(zhì)、白質(zhì)、神經(jīng)核，唾液腺上皮細(xì)胞和骨骼肌細(xì)胞中表達(dá)最高，在多種腫瘤組織或細(xì)胞系如結(jié)腸癌、膠質(zhì)瘤、白血病、淋巴瘤和腮腺癌中無表達(dá)或低表達(dá)，因此推測NDRG2基因可能是一新的抑癌基因，故研究NDRG2基因功能及其調(diào)節(jié)具有重要的理論意義及臨床應(yīng)用價(jià)值，而目前尚未見NDRG2基因與乳腺癌發(fā)生發(fā)展的詳細(xì)報(bào)道。本研究旨在探討NDRG2基因在乳腺癌發(fā)病機(jī)制中的作用，確定其功能，為乳腺癌的防治提供理論依據(jù)。本研究的主要發(fā)現(xiàn)如下：

4、>　　1、通過免疫組織化學(xué)、realtimePCR、蛋白印跡等方法檢測了NDRG2在80例臨床新鮮乳腺癌組織標(biāo)本（包括浸潤性導(dǎo)管癌54例、小葉癌18例、小葉原位癌8例）及相應(yīng)癌旁組織標(biāo)本中的表達(dá)水平。結(jié)果顯示：NDRG2mRNA在63例患者腫瘤組織中表達(dá)水平較相應(yīng)癌旁組織低，且該表達(dá)與其病理分級呈正相關(guān)；僅有5例患者的乳腺腫瘤組織中NDRG2的mRNA表達(dá)水平高于相對應(yīng)的自身腫瘤瘤旁組織；另外有12例患者兩者NDRG2mRNA的表達(dá)無差

5、異。該結(jié)果提示NDRG2基因的表達(dá)量與細(xì)胞的增殖能力成反比。表達(dá)量高的，增殖能力弱，隨著表達(dá)量的降低，增殖能力增加。
　　2、采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將NDRG2基因轉(zhuǎn)入乳腺癌細(xì)胞系SK-BR-3,經(jīng)G418篩選后獲得穩(wěn)定高表達(dá)NDRG2的亞克隆細(xì)胞系SK-BR-3-NDRG2及僅轉(zhuǎn)染載體的SK-BR-3/pcDNA3.1(+)。為下一步體外、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。利用包裝和鑒定好的重組NDRG2腺病毒轉(zhuǎn)染低表達(dá)NDRG2的人乳腺癌細(xì)胞系B

6、cap37，提高該細(xì)胞中NDRG2的表達(dá)水平，觀察NDRG2表達(dá)對Bcap37細(xì)胞生長的影響。
　　3、應(yīng)用平板克隆形成試驗(yàn)、MTT、流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞增殖能力的差異。NDRG2的高表達(dá)導(dǎo)致了乳腺癌細(xì)胞系增殖能力減弱；細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期。
　　綜上所述，抑癌候選基因NDRG2在乳腺癌組織中隨著腫瘤惡性程度的增加而表達(dá)降低；在NDRG2穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的SK-BR-3細(xì)胞和Bcap37細(xì)胞中，過表達(dá)NDRG2可有效抑制