SIRT3基因在乳腺癌中的表達及其對乳腺癌細胞增殖能力的影響.pdf

1、背景及目的：
　　乳腺癌是世界范圍內(nèi)女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤，占總癌癥病例的23％和癌癥死亡病例的14%。在我國，乳腺癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，且趨于年輕化，是對婦女健康威脅最大的疾病之一。由于缺少相應(yīng)的篩查措施或治療手段不當，我國乳腺癌的死亡率也逐漸升高。因此，深入探討乳腺癌的發(fā)病機理十分必要。隨著分子生物學(xué)機制在腫瘤學(xué)領(lǐng)域的更深入研究，分子靶向治療越來越多的展現(xiàn)出它獨有的優(yōu)勢。沉默信息調(diào)節(jié)因子家族（Sirtuins）被認為在調(diào)

2、控衰老和壽命方面發(fā)揮重要作用。Sirtuins由7個成員組成，即SIRT1-SIRT7。SIRT3作為線粒體去乙?；?，是Sirtuins家族的重要成員。最近幾年的研究發(fā)現(xiàn)SIRT3不僅參與了機體壽命的調(diào)節(jié)，其在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中亦具非常重要的作用。近期研究發(fā)現(xiàn)：SIRT3在肝癌細胞中的表達相對于癌旁組織顯著降低，且SIRT3高表達可使總生存期（OS）與RFS延長。此外，SIRT3的高表達可以抑制細胞生長并誘導(dǎo)肝癌細胞的凋亡。在肺腺癌，

3、胃癌，胰腺癌中，SIRT3表達均下調(diào)，SIRT3的過表達抑制細胞生長并誘導(dǎo)細胞死亡。與此結(jié)果相反，另有一些研究表明：在口腔鱗癌、食管癌、膀胱癌中SIRT3敲低顯著抑制腫瘤發(fā)生，起促進腫瘤進展的作用。由此發(fā)現(xiàn)，SIRT3在不同類型腫瘤中的作用機制有待進一步研究。目前關(guān)于SIRT3在乳腺癌中作用的研究尚不完善，本實驗以SIRT3為靶點，通過免疫組織化學(xué)測定其在乳腺癌組織中的表達情況，Western blot測定SIRT3在乳腺癌細胞的表達水

4、平，以及RT-PCR實驗測定SIRT3分子在RNA水平的表達，從而探討SIRT3在乳腺癌疾病進展中的作用；通過將SIRT3的表達情況與患者臨床病理特征進行相關(guān)性分析及生存分析，探討 SIRT3與乳腺癌預(yù)后相關(guān)性；通過研究SIRT3基因的過表達與敲低條件下分別對乳腺癌細胞增殖能力的影響，探討SIRT3在癌細胞中的功能和性質(zhì)，從而探索SIRT3是否有望成為乳腺癌治療的潛在靶點。
　　方法：
　　1．應(yīng)用組織芯片技術(shù)，通過免疫組化

5、法檢測SITR3在乳腺癌組織及癌旁組織的表達，評價SIRT3在乳腺癌組織的表達情況，并分析SIRT3的表達與患者臨床病理學(xué)特征的相關(guān)性。根據(jù)隨訪結(jié)果對所有病例進行單因素及多因素生存分析，分析SIRT3的表達與乳腺癌患者預(yù)后的相關(guān)性。
　　2．應(yīng)用細胞培養(yǎng)技術(shù)，通過Western blot檢測SIRT3在乳腺癌細胞系EMT6，乳腺成纖維細胞系MEFs的蛋白表達水平。
　　3．通過熒光定量PCR檢測SIRT3 mRNA在乳腺癌細

6、胞系EMT6，乳腺成纖維細胞系MEFs的表達情況。
　　4．通過MTT實驗觀察上調(diào)及下調(diào)SIRT3基因?qū)θ橄侔〦MT6細胞增殖能力的影響。
　　結(jié)果：
　　1、SIRT3在乳腺癌組織中的陽性表達率84.72%(122/144)低于癌旁正常組織表達率96.63%(86/89)。兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=7.572, P＜0.05）。SIRT3在乳腺癌中的表達與患者下列臨床病理學(xué)特征存在相關(guān)性：年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期

7、、HER-2表達（P＜0.05）；然而，SIRT3的表達與病理分級、浸潤深度、ER受體及PR受體的表達情況無關(guān)（P＞0.05）。單因素分析顯示：乳腺癌中SIRT3表達、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、HER-2表達情況與預(yù)后相關(guān)（P＜0.05）；多因素COX比例風(fēng)險分析顯示SIRT3的表達情況及TNM分期均具有獨立的預(yù)后意義。
　　2、Western blot結(jié)果顯示：乳腺癌細胞中SIRT3的表達水平明顯降低。定量數(shù)據(jù)顯示：SIRT3在乳

8、腺癌細胞的相對表達量(0.220±0.173)明顯低于非癌性細胞(0.850±0.086)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=7.133, P=0.002，P＜0.01）。
　　3、RT-PCR結(jié)果顯示：SIRT3在乳腺癌細胞的mRNA水平較非癌性細胞明顯降低。SIRT3在乳腺癌細胞中的表達水平(0.520±0.069）明顯低于非癌性細胞(0.886±0.034)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=4.729, P=0.009，P＜0.01）。