GPER激活對乳腺癌細胞增殖的影響.pdf

1、最近，一種新型膜相關(guān)雌激素受體:G蛋白偶聯(lián)雌激素受體(G protein-coupledestrogen receptor1，GPER;以前稱之為GPR30)被鑒定。GPER在結(jié)構(gòu)上不同于經(jīng)典雌激素受體ERα、ERβ，膜定位特性又賦予其新的可介導(dǎo)雌激素快速非基因組效應(yīng)的特性，從而引起研究者的廣泛關(guān)注。作為7次跨膜GPCRs，GPER通過介導(dǎo)雌激素快速非基因組效應(yīng)間接參與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控，影響下游效應(yīng)分子在相應(yīng)靶組織中發(fā)揮功能如影響細胞周期進

2、程或增殖等。近來關(guān)于G-1激活GPER對細胞增殖影響的研究日漸增多，主要集中在腫瘤和生殖系統(tǒng)領(lǐng)域，且在不同癌細胞系中報道的作用機制也有差異，有待于更多更深入的研究來闡明所涉及的機制。故本文以乳腺癌細胞MCF-7和MDA-MB-231為材料，以E2及TSA處理為對照研究G-1激活GPER對乳腺癌細胞增殖的影響，獲得的結(jié)果如下:
　　運用E2和TSA處理為對照，通過細胞計數(shù)法繪制MCF-7和MDA-MB-231生長曲線的結(jié)果如下:E2

3、處理同預(yù)期一樣促進兩種乳腺癌細胞株的生長;G-1和TSA單獨處理均可顯著抑制兩細胞株的生長，并且G-1和TSA共同處理對細胞生長的抑制效應(yīng)更顯著。表明G-1具有和TSA類似的抑制乳腺癌細胞增殖的效應(yīng)，且具有協(xié)同作用。
　　運用E2處理為對照通過流式分析對G-1處理的乳腺癌細胞MCF-7的檢測表明:同對照組相比，E2、G-1處理組S期和G2/M期細胞所占的比例均明顯升高。尤其是10-5M的G-1處理24h和48h組，G2/M期細胞的

4、比例分別高達38.7％和64.5％，結(jié)合生長曲線測定結(jié)果可知E2通過提高S期和G2/M期細胞所占的比例促進乳腺癌細胞的增殖;G-1激活GPER則通過將乳腺癌細胞阻滯在G2/M期而抑制其增殖。
　　為進一步研究G-1處理抑制乳腺癌細胞增殖的分子機制，運用Western和免疫熒光技術(shù)對MCF-7和MDA-MB-231增殖和凋亡相關(guān)蛋白及pERK、pAKT、乙?；M蛋白H3的水平進行了檢測。結(jié)果顯示細胞凋亡相關(guān)蛋白caspase6、P5

5、3的相對表達量顯著增加，MCL-1的相對表達量顯著降低;周期相關(guān)蛋白cyclin B1、P21的相對表達量顯著增加，PCNA的相對表達量顯著降低;pERK水平增加，pAKT水平降低。TSA作為已知的組蛋白去乙?；敢种苿娠@著提高相關(guān)基因啟動區(qū)組蛋白的乙?；?，參與周期和凋亡調(diào)控，我們發(fā)現(xiàn)G-1處理也可提高乳腺癌細胞內(nèi)組蛋白乙?；?，進而以與TSA相似的方式抑制細胞的增殖，促進其凋亡。免疫熒光的結(jié)果也支持上述結(jié)論。
　　通過劃痕

6、法檢測G-1激活的GPER對兩乳腺癌細胞遷移影響。結(jié)果表明:G-1激活GPER可顯著抑制兩細胞株的遷移。
　　總之，本文結(jié)果表明:G-1激活的GPER可通過抑制AKT的磷酸化、持續(xù)激活ERK、調(diào)節(jié)細胞內(nèi)凋亡和周期相關(guān)蛋白等的表達，誘導(dǎo)乳腺癌細胞凋亡和周期阻滯而抑制其增殖，并可顯著抑制其遷移。而且G-1處理和TSA一樣可引起乙?；M蛋白H3水平的升高，并以TSA處理相似的方式影響細胞周期、凋亡和遷移相關(guān)蛋白的表達或激活進而促進其凋亡