毛蕊異黃酮對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖的影響及其作用機(jī)制的探討.pdf

1、目的：
　　毛蕊異黃酮是黃芪的主要成分之一，也是天然的植物雌激素，其結(jié)構(gòu)與雌激素的結(jié)構(gòu)相似。在以往的研究中其在抗病毒以及抗心血管等疾病中表現(xiàn)出一定的效應(yīng)，尤其在對(duì)人類(lèi)惡性腫瘤增殖的抑制作用方面受到廣泛關(guān)注。在我們之前的實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果中，我們觀察到毛蕊異黃酮可以抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)凋亡，但具體機(jī)制有待進(jìn)一步探討。本實(shí)驗(yàn)擬對(duì)毛蕊異黃酮抑制乳腺癌細(xì)胞增殖的能力及其相關(guān)機(jī)制做進(jìn)一步深入的研究。
　　方法：
　　培養(yǎng)MCF-

2、7和T-47D兩種乳腺癌細(xì)胞株。MTT法對(duì)不同濃度毛蕊異黃酮作用于乳腺癌細(xì)胞MCF-7細(xì)胞和T-47D細(xì)胞24h、48h、72h后的OD值的檢測(cè)。Hoechst33258熒光染色檢測(cè)不同濃度藥物處理后MCF-7細(xì)胞的凋亡形態(tài)。熒光定量PCR檢測(cè)方法檢測(cè)于不同濃度的毛蕊異黃酮作用于的乳腺癌MCF-7細(xì)胞和T-47D細(xì)胞后，RCAS1因子的基因表達(dá)。通過(guò)用蛋白免疫印跡（Western Blot）方法分別檢測(cè)MCF-7細(xì)胞和T-47D細(xì)胞中的

3、Foxp3、RCAS1和VEGF蛋白因子的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　在MTT實(shí)驗(yàn)中，乳腺癌MCF-7和T-47D細(xì)胞的增殖活性隨毛蕊異黃酮藥物濃度的增加呈逐漸降低趨勢(shì)，通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果選取不同的藥物濃度進(jìn)行進(jìn)一度的實(shí)驗(yàn)研究。通過(guò)Hoechst33258染色實(shí)驗(yàn)，我們觀察到隨藥物濃度的增高，細(xì)胞凋亡數(shù)量增多。我們從細(xì)胞的基因及蛋白表達(dá)水平等進(jìn)一步研究毛蕊異黃酮對(duì)癌細(xì)胞的抑制作用。通過(guò)熒光PCR實(shí)驗(yàn)表明，兩種乳腺癌細(xì)胞株經(jīng)毛蕊

4、異黃酮作用后，細(xì)胞內(nèi)RCAS1的mRNA表達(dá)量上升，且與毛蕊異黃酮呈劑量大小呈相關(guān)性。WB結(jié)果表明，體外培養(yǎng)的MCF-7細(xì)胞和T-47D細(xì)胞中Foxp3和VEGF蛋白因子的表達(dá)量水平隨毛蕊異黃酮濃度的增高而表達(dá)水平下降，而RCAS1蛋白因子的表達(dá)水平隨毛蕊異黃酮濃度的增高表達(dá)水平上升。
　　結(jié)論：
　　植物雌激素毛蕊異黃酮通過(guò)影響細(xì)胞內(nèi)RCAS1蛋白表達(dá)水平增高，并降低Foxp3和VEGF的表達(dá)水平，抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞