毛蕊異黃酮對結直腸癌細胞株HCT116增殖凋亡的影響及機制的研究.pdf

1、背景:目前研究表明，使用雌激素替代療法(estrogen replacementtreatment，ERT)的圍絕經(jīng)期婦女結直腸癌發(fā)病率明顯降低。進一步研究發(fā)現(xiàn)，雌激素及其受體有抑制結直腸癌的作用，但是使用雌激素療法會增加靜脈血栓、乳腺癌和子宮內膜癌等的發(fā)生率。而植物雌激素是一類由大豆、葛根和黃芪等多種植物中提取的具有雌激素樣作用的化合物，其化學結構與雌激素相似，可以與細胞雌激素受體(estrogen receptor，ER)結合起部分

2、雌激素樣效應或抗雌激素效應，且其來源豐富、毒副作用低。因此，植物雌激素在抗腫瘤方面的作用和價值逐漸引起了人們的重視。流行病學研究發(fā)現(xiàn)，大豆中含有豐富的植物雌激素，食用豆制品可以減少人類患結直腸癌、前列腺癌和乳腺癌等腫瘤的風險。實驗進一步證明，植物雌激素可以通過競爭性結合雌激素受體或抑制酪氨酸激酶活性等作用，從而減低結腸癌、乳腺癌、前列腺癌、宮頸癌等多種腫瘤細胞的增殖并誘導凋亡。
　　黃芪為豆科黃芪屬植物，是在我國廣泛應用的傳統(tǒng)中藥

3、。其有效成分以多糖、三萜、黃酮為主，能在細胞中引起廣泛的生物學效應，在抗炎、抗病毒、抗突變、抗腫瘤等方面具有重要作用。毛蕊異黃酮作為黃芪提取物最主要的活性成分之一，具有抗氧化、護肝和抗腫瘤作用，研究發(fā)現(xiàn)毛蕊異黃酮可以與ER受體結合，抑制肺癌細胞的轉移和侵襲，抑制乳腺癌、卵巢癌、黑色素瘤的增殖并誘導凋亡，但其在結腸癌細胞中的作用及機理尚未見報道。
　　目的:本研究主要是通過體外實驗研究毛蕊異黃酮是否通過ERβ介導的EGFR/PI3K

4、-AKT或EGFR/MAPKs通路抑制結腸癌細胞增殖，誘導其凋亡，并探索毛蕊異黃酮的抗腫瘤機制。
　　方法:選用結腸癌HCT116和HT29細胞株為研究對象，在結腸癌細胞株的培養(yǎng)基中加入不同濃度的毛蕊異黃酮，采用MTT法檢測毛蕊異黃酮對細胞增殖的影響。Hoechest33258細胞核熒光染色法和流式細胞儀檢測毛蕊異黃酮作用后結腸癌細胞的凋亡情況，實時熒光定量PCR檢測ERβ、EGFR和caspase3的mRNA表達水平，Weste

5、rn blot測定EGFR、MAPKs(ERK1/2/p-ERK1/2，JNK/P-JNK，P38/P-P38)、AKT/P-AKT、Bax/Bcl-2、Caspase-3、cleaved-Caspase3的蛋白表達水平。
　　結果: MTT結果顯示毛蕊異黃酮能有效抑制結腸癌HCT116和HT29細胞的生長，且呈濃度和時間依賴性，Hoechest33258和流式細胞儀檢測的結果顯示毛蕊異黃酮能通過誘導細胞的凋亡來抑制結腸癌細胞生長

6、。實時熒光定量PCR技術檢測結果顯示在HCT116細胞中ERβ和Caspase-3 mRNA水平隨毛蕊異黃酮濃度的升高而上調，EGFRmRNA水平隨毛蕊異黃酮濃度升高而降低。Western blot結果顯示EGFR、Bcl-2隨毛蕊異黃酮濃度的增大而表達下調，而Jnk磷酸化升高，Akt隨毛蕊異黃酮濃度的增大其磷酸化下調，而Bax、Caspase-3、cleaved-Caspase3等凋亡相關蛋白表達隨毛蕊異黃酮濃度的增加而表達上調。