sfrp4過表達(dá)對結(jié)腸癌細(xì)胞株hct116基因表達(dá)譜的影響

1、SFRP4過表達(dá)對結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT116基因表達(dá)譜的影響,復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院病理科黃 丹,研 究 背 景,研究背景,,,CA Cancer J Clin. 2008; 58: 161-179,結(jié)直腸癌的發(fā)病率,研究背景,Wnt信號通路,分泌型卷曲相關(guān)蛋白SFRP,一組分泌型糖蛋白家族SFRPs有五個(gè)家族成員在人類組織中表達(dá)定位于染色體8p 12～11.1 包括一個(gè)特有的同源半胱氨酸富含域（CRD）的N-末端和一個(gè)C-

2、末端。 （除SFRP3以外）,研究背景,分泌型卷曲相關(guān)蛋白SFRP通過與Wnt信號的蛋白質(zhì)相互作用以阻止它們結(jié)合到Fz蛋白或與Fz形成無功能復(fù)合物而阻礙Wnt信號,研究背景,研 究 目 的,檢測SFRP4基因轉(zhuǎn)染腸癌細(xì)胞株HCT116后基因表達(dá)譜的變化，深入探討SFRP4在結(jié)直腸癌發(fā)生中的作用機(jī)制。,技術(shù)路線,pcDNATM 3.1-SFRP4重組質(zhì)粒,基因芯片檢測（Pathway分析）,雙酶切鑒定,,WB鑒定SFRP4表達(dá),轉(zhuǎn)染H

3、CT116后篩選穩(wěn)定表達(dá)株,,,,結(jié)果,pcDNATM 3.1-SFRP4質(zhì)粒的構(gòu)建及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染株的鑒定芯片生物信息學(xué)分析RT-PCR驗(yàn)證部分基因芯片的結(jié)果,pcDNA3.1載體大小為5500bp，SFRP4基因片段大小為1056bp,EcoRI和HindIII雙酶切重組質(zhì)粒后凝膠電泳圖,Western Blot 檢測pcDNATM 3.1-SFRP4質(zhì)粒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HCT116細(xì)胞后SFRP4的表達(dá),0道為pcDNA3.1空載體

4、，1和2道為pcDNA3.1-SFRP4,pcDNATM 3.1-SFRP4質(zhì)粒的構(gòu)建及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染株的鑒定芯片生物信息學(xué)分析RT-PCR驗(yàn)證部分基因芯片的結(jié)果,上調(diào)的MAPK家族基因,下調(diào)的TNF家族基因,凋亡相關(guān)基因的改變,pcDNATM 3.1-SFRP4質(zhì)粒的構(gòu)建及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染株的鑒定芯片生物信息學(xué)分析RT-PCR驗(yàn)證部分基因芯片的結(jié)果,1，細(xì)胞轉(zhuǎn)染SFRP4前；2，細(xì)胞轉(zhuǎn)染SFRP4后。β-actin作為對照。,RT

5、-PCR驗(yàn)證基因芯片結(jié)果,討論,我們通過基因芯片技術(shù)對基因組進(jìn)行高通量的研究，通過生物信息學(xué)分析，我們篩選出比較重要的p38MAPK信號通路相關(guān)基因、TNF家族基因和凋亡有關(guān)基因的變化來探討SFRP4對腫瘤細(xì)胞的作用機(jī)制。,討論,MAPK信號通路參與細(xì)胞增殖、分化及凋亡的調(diào)控，并在細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的病理過程中發(fā)揮重要作用 腫瘤壞死因子（TNF）家族是一類具有廣泛生物學(xué)活性的分子，具有抗腫瘤、調(diào)節(jié)細(xì)胞生長分化等作用。它能直接抑制腫瘤增殖和