Twist基因在不同結(jié)腸癌細(xì)胞株中的表達(dá)情況的研究.pdf

1、目的：Twist基因是存在于人、果蠅、鼠等生物體內(nèi)的堿性螺旋-環(huán)-螺旋(bHLH)，作為一種轉(zhuǎn)錄因子，主要表達(dá)于胚胎中胚層、胎盤及成人的某些中胚層來源的未分化組織。Twist表達(dá)的蛋白在人有202個(gè)氨基酸、小鼠有206個(gè)氨基酸、蟾蜍有166個(gè)氨基酸序列構(gòu)成，其中人類和小鼠的氨基酸序列具有96％的同源性，在不同的種屬中其DNA結(jié)合區(qū)域有著100％的序列保守，所有Twist基因都能結(jié)合E-box的DNA序列：CANNTG。Twist基因在轉(zhuǎn)

2、錄水平上調(diào)控多種基因的表達(dá)，最初在胚胎發(fā)育過程中，發(fā)現(xiàn)它生物學(xué)功能，它可以通過促進(jìn)EMT來調(diào)節(jié)胚胎的發(fā)育。近期研究結(jié)果證實(shí)Twist參與了多種上皮來源的腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮-間葉變(EMT)并促進(jìn)癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移，同時(shí)Twsit基因在腫瘤進(jìn)展中可以誘導(dǎo)一系列間充質(zhì)標(biāo)志物的產(chǎn)生。研究表明，Twist基因高表達(dá)于多種實(shí)體瘤中（包括乳腺癌、前列腺癌、黑色素瘤以及骨肉瘤），并能夠促進(jìn)人乳腺癌和黑色素瘤細(xì)胞系的凋亡。也有研究證實(shí)Twist在人類的乳腺癌

3、、結(jié)腸癌、腎癌、胃癌、肝癌、正常肝細(xì)胞等6種細(xì)胞系中，在結(jié)腸癌細(xì)胞系中的表達(dá)最高，而在正常肝臟細(xì)胞的表達(dá)最低。目前有研究表明Twist在結(jié)腸癌中高表達(dá)，但是Twist在不同結(jié)腸癌癌細(xì)胞系中表達(dá)情況如何，尚無具體定論。本研究通過RT-PCR和Western-blot檢測(cè)Twist在不同結(jié)腸癌細(xì)胞株中的表達(dá)情況，區(qū)分出高表達(dá)及低表達(dá)細(xì)胞株，為以后深入研究Twist在結(jié)腸癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 1、運(yùn)

4、用RT-PCR方法檢測(cè)TwistmRNA在結(jié)腸癌細(xì)胞株SW480，SW620及HCT116中的表達(dá)情況。
　　 2、運(yùn)用Western-blot方法檢測(cè)Twist蛋白在結(jié)腸癌細(xì)胞株SW480，SW620及HCT116中的表達(dá)情況。
　　 3、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析運(yùn)用SPSS13.0軟件，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，組間比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1、不同細(xì)胞系

5、中TwistmRNA的表達(dá)情況
　　 RT-PCR結(jié)果顯示：HCT116、SW480、SW620三種結(jié)腸癌細(xì)胞株中的TwistmRNA表達(dá)量分別為0.985±0.015、0.506±0.020、0.445±0.025．結(jié)果所示：其中在HCT116細(xì)胞中的相對(duì)表達(dá)量顯著高于其它兩株，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。SW480細(xì)胞及SW620細(xì)胞中表達(dá)依次降低，兩組間差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2、不同細(xì)胞系中Twist蛋白的表達(dá)情況<

6、br>　　 Western-blot結(jié)果顯示：HCT116、SW480、SW620三種結(jié)腸癌細(xì)胞株中的Twist蛋白的表達(dá)量分別為1.488±0.060、0.751±0.022、0.651±0.030．結(jié)果所示：其中在HCT116細(xì)胞中的相對(duì)表達(dá)量顯著高于其它兩株，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。SW480細(xì)胞及SW620細(xì)胞中表達(dá)依次降低，兩組間差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：Twist基因在三種細(xì)胞系中的表達(dá)量具有顯著性差異，其中在