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文檔簡介
1、目的:構建pCDF-Twist慢病毒表達載體,在結(jié)腸癌HT29細胞系中高表達Twist,研究Twist對結(jié)腸癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響。檢測Twist在不同結(jié)腸癌組織中的表達。
方法:用RT-PCR的方法克隆出人Twist的基因序列,酶切后插入pCDF質(zhì)粒構建pCDF-Twist慢病毒真核表達載體,酶切及測序鑒定后包裝慢病毒感染結(jié)腸癌HT29細胞系,獲得Twist高表達的細胞株并檢測Twist、E-cadherin、Vimentin
2、等相關蛋白的表達情況。細胞劃痕實驗觀察Twist對HT29細胞遷移能力的影響。收集48例結(jié)腸癌手術標本(包括癌旁組織標本)。用免疫組化方法檢測分析Twist在結(jié)直腸癌組織和癌旁組織中的表達情況。
結(jié)果:
1.pCDF-Twist質(zhì)粒經(jīng)酶切、測序鑒定正確,熒光圖像顯示慢病毒構建成功。
2.WesternBlot檢測結(jié)果顯示穩(wěn)定感染pCDF-Twist慢病毒的HT29細胞中Twist、Vimentin表達水平增
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