GSTA1對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響研究.pdf

1、東北農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文GSTA1對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響研究姓名：李蕊申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：獸醫(yī)學(xué)；基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：張秀英20120608東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)博士學(xué)位論文對(duì)Caco2和HT29細(xì)胞不同生長(zhǎng)時(shí)期GSTAl表達(dá)及活性檢測(cè)的結(jié)果表明，Caeo2細(xì)胞中GSTAl蛋白、mRNA表達(dá)與活性隨著細(xì)胞的匯合程度逐漸升高。與匯合前期相比較，匯合期GSTAl蛋白、mRNA及酶活性分別升高了1888、3018和1994倍(PO05)。

2、神經(jīng)酰胺處理后，3個(gè)組細(xì)胞存活率均降低，但各組間并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(PO05)。對(duì)照組、siRNA轉(zhuǎn)染組和陰性對(duì)照組均無(wú)激活型caSp勰e3蛋白表達(dá)，神經(jīng)酰胺處理后，3個(gè)組的c嬲paSe3蛋白也均未被激活。雙酶切和序列測(cè)定表明本試驗(yàn)成功構(gòu)建了重組真核表達(dá)載體GSTAlpcDNA31／V5HisTOPO并將其瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至HT29細(xì)胞中。采用westernblotting方法確定轉(zhuǎn)染劑Lipofectamine2000為31xl／mL、3昭質(zhì)粒、

3、轉(zhuǎn)染48h為最佳的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染條件。在此基礎(chǔ)上研究GSTAl過(guò)表達(dá)對(duì)神經(jīng)酰胺介導(dǎo)的HT29細(xì)胞增殖和凋亡的影響。結(jié)果表明，對(duì)照組、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組和陰性對(duì)照組細(xì)胞存活率差異不顯著(P005)，神經(jīng)酰胺處理后，3個(gè)組細(xì)胞存活率均降低，但各組間并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P005)。對(duì)照組、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組和陰性對(duì)照組均無(wú)激活型easpaSe3蛋白表達(dá)，神經(jīng)酰胺處理后，3個(gè)組的激活型caSpaSe3蛋白表達(dá)均增加，但各組間差異不顯著(P005)。外源性C2神經(jīng)酰胺可顯

4、著抑制Caco2和HT29結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖，不能誘導(dǎo)Caco2凋亡，但可誘導(dǎo)HT29凋亡。Caco一2細(xì)胞中GSTAI蛋白、mRNA表達(dá)量與活性隨細(xì)胞匯合程度逐漸增加，而HT29細(xì)胞各生長(zhǎng)時(shí)期中GSTAI表達(dá)量極低或不表達(dá)。外源性c2神經(jīng)酰胺處理的Caco2細(xì)胞中GSTAl蛋白、mRNA表達(dá)量與活性顯著升高，而神經(jīng)酰胺處理的HT29細(xì)胞仍然檢測(cè)不到GSTAl的表達(dá)?；蜣D(zhuǎn)染試驗(yàn)證實(shí)了GSTAl的沉默或過(guò)表達(dá)對(duì)神經(jīng)酰胺介導(dǎo)的結(jié)腸癌細(xì)胞增殖