MMS2和P53基因?qū)Y(jié)腸癌細(xì)胞增殖與凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　探討MMS2基因與P53基因在人結(jié)腸癌細(xì)胞THC-8307中相互作用關(guān)系以及二者共同對(duì)人高分化結(jié)腸癌細(xì)胞（THC-8307）增殖與凋亡的調(diào)控作用。
　　方法：
　　以脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將MMS2siRNA與P53siRNA分別轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌細(xì)胞THC-8307以沉默相對(duì)應(yīng)靶基因。轉(zhuǎn)染48小時(shí)后，實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-qPCR）及蛋白印記法(Western Blot）分別檢測(cè)各組細(xì)胞中MMS2與P53的mRNA

2、和蛋白表達(dá)量水平，以檢測(cè)其各自沉默效率。選擇沉默效率具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的處理細(xì)胞作為試驗(yàn)組細(xì)胞，同時(shí)將未作處理的THC-8307作為空白對(duì)照組，轉(zhuǎn)染陰性質(zhì)粒細(xì)胞作為陰性對(duì)照組。采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-qPCR）及蛋白印記法（Western Blot）分別檢測(cè)沉默MMS2基因48h后P53基因在mRNA和蛋白水平表達(dá)量的變化以及沉默P53基因后MMS2基因在mRNA和蛋白水平表達(dá)量的變化并分析。以流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cytometr

3、y,FCM）檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡率，觀察MMS2基因與P53基因在對(duì)結(jié)腸癌THC-8307細(xì)胞Z增殖與凋亡水平的調(diào)控作用。
　　結(jié)果：
　　實(shí)驗(yàn)組與兩對(duì)照組相比，沉默MMS2基因的人高分化結(jié)腸癌細(xì)胞THC-8307內(nèi)P53基因在mRNA與蛋白水平表達(dá)量顯著升高（P＜0.05）；同時(shí)，沉默P53基因的結(jié)腸癌細(xì)胞THC-8307的細(xì)胞內(nèi)MMS2基因在mRNA與蛋白水平表達(dá)量顯著升高（P＜0.05）；兩對(duì)照組間無(wú)明顯差異（P＞0.0