沉默MMS2和REV3基因表達(dá)逆轉(zhuǎn)結(jié)腸癌細(xì)胞耐藥性.pdf

1、目的：探討沉默MMS2和REV3基因表達(dá)對(duì)人耐藥性結(jié)腸癌細(xì)胞（THC8307/L-OHP）耐藥逆轉(zhuǎn)的影響。
　　方法：以人高分化耐奧沙利鉑結(jié)腸癌細(xì)胞（THC8307/L-OHP）為實(shí)驗(yàn)材料，采用脂質(zhì)體-質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)構(gòu)建帶有干擾目的基因MMS2和REV3的miRNA片段和攜帶綠色熒光蛋白標(biāo)記的重組質(zhì)粒（pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-MMS2和pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-REV3）的細(xì)胞系，通過實(shí)時(shí)熒光定

2、量PCR（real-time fluorescent quantitative PCR，qRT-PCR）和免疫熒光技術(shù)（immunostaining technique）檢測(cè)該細(xì)胞系干擾效率，選擇MMS2和REV3低表達(dá)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的上述細(xì)胞系作為實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞，同時(shí)將未曾作過處理的THC8307/L-OHP細(xì)胞作為空白對(duì)照組，轉(zhuǎn)染綠色熒光蛋白空質(zhì)粒（pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR）的THC8307/L-OHP細(xì)胞作為陰性對(duì)照

3、組，分別轉(zhuǎn)染單基因miRNA片段和攜帶綠色熒光蛋白標(biāo)記的重組質(zhì)粒為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組；應(yīng)用噻唑藍(lán)比色分析實(shí)驗(yàn)（MTT）、羅丹明123實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組細(xì)胞對(duì)L-OHP藥物敏感度、細(xì)胞凋亡變化。
　　結(jié)果：MMS2基因在THC8307/L-OHP中的表達(dá)量顯著高于敏感細(xì)胞株THC8307（P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞MMS2和REV3基因表達(dá)被成功抑制，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的L-OHP半數(shù)抑制濃度(half inhibit

4、ion concentration，IC50)及耐藥指數(shù)（resistance index，RI）減低(P＜0.05)，且經(jīng)L-OHP處理后，其凋亡率顯著增高(P＜0.05)。同一細(xì)胞同時(shí)導(dǎo)入2個(gè)不同的miRNA質(zhì)粒載體序列不會(huì)相互干擾對(duì)方的基因表達(dá)和沉默效應(yīng)變化。
　　結(jié)論：下調(diào)MMS2和REV3基因可逆轉(zhuǎn)人結(jié)腸癌細(xì)胞對(duì)L-OHP的耐藥性并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，且MMS2和REV3雙基因共沉默抑制耐藥性結(jié)腸癌細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡的作用