蛋白酶體抑制劑bortezomib逆轉(zhuǎn)結(jié)腸癌細胞獲得性TRAIL耐藥的機制研究.pdf

1、浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文蛋白酶體抑制劑btezomib逆轉(zhuǎn)結(jié)腸癌細胞獲得性TRAIL耐藥的機制研究姓名：陳琳琳申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：何超20080401浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文關(guān)蛋白的表達水平；用wbStem免疫印跡法聯(lián)合Optimaus軟件檢測細胞中Bik蛋白的穩(wěn)定性，并進行相對定量和計算半衰期；通過轉(zhuǎn)染Bil【si對臨阻斷Bik蛋白表達后再用流式細胞儀檢測各處理組的細胞凋亡率。各處理組間的差異采用非配對的芒檢驗來評估

2、。【結(jié)果和討論】1)Bortezomib聯(lián)合重組人矸認(rèn)IL蛋白逆轉(zhuǎn)DLDl細胞對TRAIL的獲得性耐藥：用不同濃度(O5斗M一50“M)的bonezomib聯(lián)合重組人TRAIL蛋白(20ng／m1)處理DLDlTRAIL瓜細胞后，MTT比色法檢測結(jié)果顯示，聯(lián)合作用4小時和24小時兩個時間點，聯(lián)合處理組細胞的相對細胞存活率較單用bonezomib組均有明顯下降(p005)，說明bortezomib使獲得性TI認(rèn)IL耐藥的DLDlTRAIL

3、瓜細胞對TRAIL蛋白治療重新敏感。進一步的流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)聯(lián)合處理組細胞大量停滯于G1期；2)BonezoIllib聯(lián)合重組人TRAIL蛋白活化耐藥細胞的凋亡信號通路：Wbstem免疫印跡結(jié)果顯示，bortezomib(1“M)聯(lián)合重組人n認(rèn)IL蛋白(20n咖1)處理后，DLDlTR舭L瓜細胞中各種凋亡信號分子包括caspaSe_8，caspaSe9，caSpaSe3，Bid，Pf6d嬸蛋白均明顯活化，線粒體中的細胞色素C和smaC

4、蛋白大量地釋放到細胞漿中，這些結(jié)果提示bonezoIIlib有效地放大了，n認(rèn)IL介導(dǎo)的凋亡信號，這一放大作用可能主要是通過它啟動線粒體凋亡途徑而發(fā)揮作用的；3)Bonezomib上調(diào)耐藥細胞中DR5和Bik蛋白的表達：為解釋bonezoIllib逆轉(zhuǎn)矸認(rèn)IL耐藥的可能機制，我們進一步用w|estem免疫印跡法檢測可能成為蛋白酶體抑制劑作用靶點的凋亡信號分子，包括DIⅥ、DR5、Bcl2家族成員以及XIAP和SurViv訪等蛋白分子，發(fā)

5、現(xiàn)凋亡誘導(dǎo)蛋白Bik的表達水平明顯增高，死亡受體DR5的表達輕微增高，而其他分子卻無明顯變化；4)Bonezomib顯著提高耐藥細胞中Bik蛋白的穩(wěn)定性：為了進一步闡明bonezomib上調(diào)Bil【蛋白的機理，我們用PBS和bortezomib(1肛M)分別處理DLDl一TRAIL瓜細胞6小時，再加入CycloheXimide(25∥m1)抑制新蛋白的合成，收集細胞蛋白行wbstem免疫印跡檢測Bik蛋白的表達，并利用0ptilllaS