Semaphorin3F下調(diào)整合素αvβ3表達逆轉(zhuǎn)結(jié)腸癌細胞多細胞耐藥的實驗研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文Semaphin3F下調(diào)整合素αvβ3表達逆轉(zhuǎn)結(jié)腸癌細胞多細胞耐藥的實驗研究姓名：鄭晨宏申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：梁后杰20090501第三軍醫(yī)人學(xué)碩士學(xué)位論文2應(yīng)用I弭PCR、免疫組化、激光共聚焦方法，觀察細胞粘附分子整合素Qvp3在結(jié)腸癌細胞多細胞耐藥體外模型的表達，并比較其與普通平面培養(yǎng)表達的差異。通過整合素QvB3抗體阻斷粘附分子整合素0Lvp3表達，觀察結(jié)腸癌細胞群集耐藥性的情況。3應(yīng)用M

2、TT和Radialoutgrowth方法，檢測和比較三維球型培養(yǎng)條件下穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Sema3F基因前后，結(jié)腸癌HT29細胞化療敏感性的情況，以及Sema3F對整合素avp3的作用。結(jié)果1成功建立結(jié)腸癌細胞多細胞三維培養(yǎng)模型(圖1)，掃描電鏡和透射電鏡顯示，多細胞球球體直徑在10—2Omm不等；可見橋粒和粘著小帶等細胞緊密連接(圖2，圖3)。結(jié)腸癌HT29、LoVo細胞中Sema3FmRNA(圖17)和蛋白(圖18)表達較低。2整合素QvD3

3、mRNA(圖8)及蛋白(圖9，圖lO)，在三維球型較普通平面培養(yǎng)相比表達明顯增高；球型細胞與普通平面細胞相比，對化療藥物更加耐藥；整合素0【vD3抗體阻斷整合素僅vD3后，可提高多細胞球球體對化療藥物的敏感性(圖7)。3建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Sema3F的結(jié)腸癌HT29細胞三維培養(yǎng)模型。不同濃度5一FU(0，125，250，500，1000，2000lg／m1)作用HT29細胞48h后，MTT法(圖24)及Radialoutgrowthassay

4、(圖25)，流式細胞檢測(圖4，5，13)以及克隆形成試驗(圖26)檢測穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Sema3F多細胞球球體與對照組相比較，轉(zhuǎn)染后的細胞三維球型化療敏感性明顯增加。檢測轉(zhuǎn)染Sema3F后細胞以及空轉(zhuǎn)對照以及HT29細胞整合素avp3蛋白表達水平發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染Sema3F的結(jié)腸癌HT29細胞可以下調(diào)整合素0【vD3蛋白表達。結(jié)論1結(jié)腸癌細胞多細胞耐藥體外模型與普通平面培養(yǎng)細胞相比結(jié)構(gòu)更加緊密；多細胞球球體對化療藥物的敏感性與普通平面培養(yǎng)細胞相比，