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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
探討整合素αvβ6對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子Ets-1表達(dá)的影響;明確整合素αvβ6-ERK2直接連接在調(diào)控Ets-1表達(dá)過(guò)程中發(fā)揮的作用。
方法:
1.流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組結(jié)腸癌SW480細(xì)胞表面αvβ6的表達(dá)水平;
2.結(jié)腸癌SW480細(xì)胞分為3組:(1)SW480組:野生型結(jié)腸癌SW480細(xì)胞,無(wú)β6表達(dá);(2)SW480β6組:轉(zhuǎn)染β6的結(jié)腸癌SW480細(xì)胞,可穩(wěn)定表達(dá)β
2、6;(3)SW480Mock組:轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒,作為陰性對(duì)照,采用westernblotting法分別檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組Ets-1、ERK的表達(dá)水平以及ERK磷酸化水平;
3.結(jié)腸癌SW480細(xì)胞分為3組:(1)SW480β6組:轉(zhuǎn)染β6的結(jié)腸癌SW480細(xì)胞,可穩(wěn)定表達(dá)β6;(2)SW480Mock組:轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒,作為陰性對(duì)照;(3)SW480β6Del.mutant組:敲除β6胞內(nèi)段ERK2結(jié)合位點(diǎn),采用westernblott
3、ing法分別檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組ERK磷酸化水平;
4.結(jié)腸癌SW480細(xì)胞分為5組:(1)SW480β6組;(2)SW480Mock組;(3)SW480β6Del.mutant組;(4)SW480β6細(xì)胞+DMSO組:陰性對(duì)照;(5)SW480β6細(xì)胞+PD98059組:用含20μmol/LPD98059的培養(yǎng)基培養(yǎng)結(jié)腸癌細(xì)胞SW480β624h;采用westernblotting法分別檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組Ets-1表達(dá)水平;
4、 5.半定量光密度分析所得數(shù)據(jù)均采用單因素方差分析和LSD檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
結(jié)果及意義:
1.SW480β6和SW480β6Del.mutant細(xì)胞均有αvβ6表達(dá),轉(zhuǎn)染后的結(jié)腸癌SW480細(xì)胞可以穩(wěn)定表達(dá)整合素αvβ6;
2.SW480β6細(xì)胞Ets-1的表達(dá)量較SW480細(xì)胞明顯增多(P<0.05),同時(shí)ERK的磷酸化水平(p-ERK)也明顯升高,而總ERK(t-E
5、RK)表達(dá)水平二者無(wú)明顯差異,整合素αvβ6能夠促進(jìn)ERK的磷酸化,也能夠提高核轉(zhuǎn)錄因子Ets-1的表達(dá)水平;
3.SW480β6Del.mutant細(xì)胞ERK2的磷酸化水平較SW480β6細(xì)胞明顯降低;SW480β6Del.mutant細(xì)胞和PD98059處理的SW480β6細(xì)胞Ets-1的表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組(P<0.05),由此可以推測(cè)整合素αvβ6是通過(guò)αvβ6-ERK2直接連接促進(jìn)核轉(zhuǎn)錄因子Ets-1的表達(dá)。<
6、br> 綜上所述,本實(shí)驗(yàn)深入研究分析了整合素αvβ6與結(jié)腸癌細(xì)胞中ERK磷酸化及Ets-1表達(dá)的密切關(guān)系,證實(shí)αvβ6通過(guò)αvβ6-ERK2直接連接提高ERK2的磷酸化水平,從而促進(jìn)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子Ets-1表達(dá)。進(jìn)一步從分子水平闡釋了整合素αvβ6促進(jìn)結(jié)腸癌惡性進(jìn)展的作用機(jī)制,為深入研究αvβ6在結(jié)腸癌增殖、侵襲轉(zhuǎn)移及化療耐藥等惡性生物學(xué)行為中發(fā)揮的作用提供了理論基礎(chǔ),也為以αvβ6及其相關(guān)蛋白為靶點(diǎn)對(duì)結(jié)腸癌進(jìn)行靶
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