As-,2-O-,3-下調(diào)K562細(xì)胞β1整合素表達(dá)逆轉(zhuǎn)細(xì)胞粘附介導(dǎo)的耐藥.pdf

1、1．研究背景和目的：骨髓微環(huán)境可以保護(hù)白血病細(xì)胞，促使白血病細(xì)胞耐藥，導(dǎo)致化療后微小病灶殘留（minimal residual disease MRD）成為復(fù)發(fā)的根源。本實(shí)驗(yàn)在體外分離培養(yǎng)初治慢性粒細(xì)胞白血病患者的骨髓原代基質(zhì)細(xì)胞（bone marrow stromal cellBMSC），模擬慢性粒細(xì)胞白血病患者骨髓微環(huán)境，觀察慢性粒細(xì)胞白血病骨髓基質(zhì)細(xì)胞對(duì)K562細(xì)胞的保護(hù)作用，以及K562細(xì)胞經(jīng)過As2O3單藥及與常規(guī)化療藥物聯(lián)合

2、處理后，細(xì)胞間粘附作用及對(duì)藥物敏感性的變化，探討As2O3逆轉(zhuǎn)細(xì)胞粘附介導(dǎo)的耐藥（CAM—DR）的作用及其機(jī)制。 2．實(shí)驗(yàn)方法: 2．1細(xì)胞培養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)分組 分離慢性粒細(xì)胞白血病患者骨髓基質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)后，模擬白血病骨髓微環(huán)境與K562細(xì)胞共培養(yǎng)，同時(shí)設(shè)K562細(xì)胞懸浮培養(yǎng)為對(duì)照組。 2．2 MTT法測定藥物對(duì)K562細(xì)胞的生長抑制作用 通過MTT法檢測K562細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性及As2O3

3、與化療藥物聯(lián)合的效應(yīng)。通過對(duì)存活細(xì)胞百分?jǐn)?shù)和藥物濃度的線性回歸分析方法計(jì)算IC50值。用金正均q值法分析藥物之間相互作用。 2．3流式細(xì)胞學(xué)檢測細(xì)胞凋亡 用AnnexinV/PI雙染法檢測共培養(yǎng)組和懸浮組K562細(xì)胞凋亡率的差異，觀察As2O3對(duì)兩組細(xì)胞凋亡率的影響。 2．4骨髓基質(zhì)細(xì)胞對(duì)K562細(xì)胞粘附率測定 將K562細(xì)胞按濃度或用藥時(shí)間兩種方式處理后與BMSC粘附，通過粘附?jīng)_洗實(shí)驗(yàn)觀察經(jīng)As2O3處

4、理后K562細(xì)胞粘附率變化。 2．5蛋白免疫印記檢測β1整合素蛋白水平的表達(dá) 將按濃度或用藥時(shí)間兩種方式處理后處理過的K562細(xì)胞提取全細(xì)胞蛋白，用蛋白酶免疫印跡法檢測β1整合素蛋白表達(dá)的情況。 2．6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)采用x—±s表示，利用SAS8．0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用t檢驗(yàn)，P<0．05即認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3．結(jié)果： 化療藥物對(duì)共培養(yǎng)后的K562細(xì)胞抑制率與單獨(dú)懸浮培養(yǎng)組比較顯著降

5、低：0．1μM Ara—C抑制率（47．1±8．5％ VS35．2±2．1％），DNR IC50（0．045±0．006 VS0．082±0．009μM，P<0．01）；然而As2O3對(duì)共培養(yǎng)后的K562細(xì)胞與單獨(dú)懸浮培養(yǎng)組比較IC50無明顯差異（1．602±0．392 VS1．681±0．142μM，P>0．05），且As2O3與化療藥物聯(lián)合作用時(shí)兩組間抑制率也無明顯差異。通過金正均Q值法分析得出：在懸浮組藥物聯(lián)合為相加作用，而共培養(yǎng)