As-,2-O-,3-誘導宮頸癌HeLa細胞凋亡的氧化還原調節(jié)研究.pdf

1、目的：檢測三氧化二砷(As2O3)對人乳頭瘤病毒(HPV)陽性宮頸癌HeLa細胞和胰腺癌AsPC-1細胞(HPV陰性)的凋亡誘導作用和它對細胞內H2O2水平的影響，探討As2O3誘導HeLa細胞凋亡的分子機制；驗證HPV感染與As2O3誘導腫瘤細胞凋亡的關系；用As2O3和維生素C誘導HeLa細胞凋亡，探討維生素C是否能增強As2O3誘導宮頸癌HeLa細胞凋亡，以及它對細胞內H2O2水平的影響；探討單獨維生素C是否能誘導實體腫瘤宮頸癌H

2、eLa細胞凋亡，及其相關作用機制，為臨床治療宮頸癌提供新思路。 方法：采用不同濃度的As2O3處理HeLa細胞和AsPC-1細胞不同時段，用MTT法、光學顯微鏡觀察、電鏡、流式細胞儀等方法檢測As2O3對HeLa細胞和AsPC-1細胞生長抑制作用和誘導細胞凋亡作用；用不同濃度的As2O3處理細胞2h、5h、8h、12h、24h后，用DCFH-DA標記檢測細胞內的H2O2水平。采用維生素C和As2O3聯(lián)合或不同濃度的維生素C單獨處

3、理HeLa細胞不同時段觀察凋亡情況，測定細胞內的過氧化氫(H2O2)水平的變化情況變化。 結果：2μmol/LAs2O3處理HeLa細胞48h后細胞的生長受到明顯抑制，表現出細胞凋亡的特征，隨著As2O3濃度的增加和作用時間的延長效果更加明顯。而1μmol/LAs2O3處理AsPC-1細胞24h即呈現明顯的生長抑制和凋亡特征。As2O3處理HeLa細胞后細胞內H2O2的水平比對照組明顯升高，持續(xù)一段時間后又下降，并呈現明顯的劑量

4、依賴性。As2O3同樣影響AsPC-1細胞內H2O2的水平。維生素C和As2O3聯(lián)合處理HeLa細胞較單一As2I3處理HeLa細胞的凋亡率增加，且出現凋亡的時間提早。聯(lián)合用藥48h后檢測細胞內H2O2的水平，發(fā)現細胞內H2O2的水平比對照組低。較高濃度維生素C(0.5mmol/L)單獨處理HeLa細胞24h后細胞的生長也受到抑制，表現出細胞凋亡的特征，且MTT檢測和流式細胞分析的結果顯示有劑量和時間依賴性。檢測細胞內H2O2水平，發(fā)現

5、維生素C也能提高HeLa細胞內H2O2水平，且呈現明顯的劑量依賴性。 結論：1、As2O3可抑制HPV陽性的人宮頸癌HeLa細胞和HPV陰性的人胰腺癌AsPC-1細胞增殖，誘導其凋亡，這與上調細胞內H2O2水平有關。2、H2O2積累是As2O3誘導細胞凋亡途徑中的早期事件。3、As2O3誘導腫瘤細胞凋亡在不同細胞系機制可能不一樣，As2O3下調HeLa細胞HPV致瘤蛋白表達可能是As2O3誘導細胞凋亡的下游事件。4、小劑量維生素