EGCG誘導(dǎo)宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:宮頸癌是嚴(yán)重威脅我國(guó)婦女健康的惡性腫瘤之一?；熖岣吡酥型砥趯m頸癌患者的緩解率,但由于其毒副作用和腫瘤細(xì)胞耐藥,部分患者臨床療效難盡人意。本研究旨在探討表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)體外誘導(dǎo)宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡及其機(jī)制,為開(kāi)發(fā)與尋找新藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:采用MTT法檢測(cè)EGCG抑制HeLa細(xì)胞生長(zhǎng)的IC50值;通過(guò)普通光鏡、平皿克隆和繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線觀察

2、EGCG對(duì) HeLa細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用;Hochest33258染色法、流式細(xì)胞儀及DNA凝膠電泳法檢測(cè)EGCG誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞凋亡的情況;采用RT-PCR、免疫細(xì)胞化學(xué)染色和Western-blotting檢測(cè)了Caspase-3基因和蛋白的表達(dá);同時(shí)運(yùn)用Western-blotting檢測(cè)活化Caspase-3蛋白和裂解的PARP-1蛋白的表達(dá)情況;另外,選用免疫細(xì)胞化學(xué)染色觀察PARP-1蛋白在EGCG處理HeLa細(xì)胞后胞核與胞漿

3、的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1、EGCG抑制HeLa細(xì)胞生長(zhǎng)的IC50值為36.82mg.L-1;
　　2、普通光鏡觀察、平皿克隆和細(xì)胞生長(zhǎng)曲線結(jié)果顯示,隨著 EGCG濃度增加,處理時(shí)間延長(zhǎng),對(duì)HeLa細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用不斷增加,且呈濃度依賴(lài)性（n=3,P<0.05);
　　3、Hochest33258染色結(jié)果顯示,EGCG處理HeLa細(xì)胞中出現(xiàn)了典型的凋亡形態(tài)學(xué)改變?nèi)绾怂榱?、核濃縮等。與對(duì)照組比較,隨著 EGCG濃

4、度的增加,凋亡細(xì)胞數(shù)不斷增多(n=3,P<0.05)。
　　4、流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示,經(jīng)EGCG處理后,隨著濃度的升高,HeLa細(xì)胞的凋亡率逐漸增加,呈濃度依賴(lài)性誘導(dǎo) HeLa細(xì)胞的凋亡(n=3,P<0.05)。
　　5、DNA瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果顯示,EGCG處理HeLa細(xì)胞后可見(jiàn)DNA梯形條帶,且隨著濃度升高,條帶越明顯。
　　6、RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,隨著ECGC濃度的升高,Caspase-3基因的表達(dá)逐

5、漸增強(qiáng)(P<0.05)。
　　7、Western-blotting檢測(cè)結(jié)果顯示,隨著EGCG濃度的升高,HeLa細(xì)胞中Caspase-3蛋白的表達(dá)逐漸增加(P<0.05),EGCG呈濃度依賴(lài)性誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞中Caspase-3蛋白的表達(dá)。
　　8、免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)結(jié)果顯示,Caspase-3蛋白主要在 HeLa細(xì)胞漿中表達(dá),且隨著EGCG濃度的升高,其表達(dá)也逐漸增加(P<0.05)。
　　9、Western-bl

6、otting結(jié)果顯示,隨著EGCG濃度的升高,HeLa細(xì)胞中活化Caspase-3蛋白和裂解的PARP-1蛋白表達(dá)均逐漸增加(P<0.05)。
　　10、免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示,PARP-1蛋白在HeLa細(xì)胞核與胞漿表達(dá),隨著EGCG濃度的升高,PARP-1蛋白在胞漿中的表達(dá)量逐漸增加而胞核中含量減少(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、EGCG體外呈劑量依賴(lài)性抑制宮頸癌HeLa細(xì)胞生長(zhǎng)。
　　2、EGCG體