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文檔簡介
1、白藜蘆醇對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞凋亡、增殖及侵襲的影響白藜蘆醇(Resveratrol,Res)是一種含有芪類結(jié)構(gòu)的非黃酮類多酚化合物,廣泛分布在虎杖、葡萄、花生等植物中,具有多種生理及藥理活性。研究表明Res可具有抗炎、抗菌、抗氧化、抑制血小板聚集、降血脂等多種生物學(xué)功能。目前,Res被認(rèn)為是一種很有潛力的腫瘤抑制劑,國內(nèi)外在白血病、乳腺癌、肝癌、肺癌、大腸癌、卵巢癌等腫瘤中研究較多,但在宮頸癌中的研究少有報(bào)道。 目的:研究不同
2、濃度白藜蘆醇對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞體外生長的影響,并初步探討其作用機(jī)制。 方法:用不同濃度的白藜蘆醇作用于人宮頸癌Hela細(xì)胞,通過MTT法來檢測白藜蘆醇對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞增殖的影響;采用細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察及TdT 酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記法(TUNEL試劑盒)檢測白藜蘆醇對(duì)Hela細(xì)胞凋亡的影響;通過體外侵襲實(shí)驗(yàn)(transwell小室)檢測白藜蘆醇對(duì)Hela細(xì)胞侵襲能力的影響;通過Survivin,Caspase-3與β
3、-catenin等蛋白的細(xì)胞免疫組化檢測技術(shù)來初步探討白藜蘆醇對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞的作用機(jī)制。 結(jié)果: 1、不同濃度白藜蘆醇濃度對(duì)Hela細(xì)胞均有抑制作用。 2、白藜蘆醇在25μmol/L-100μmol/L 范圍內(nèi)呈時(shí)間和劑量依賴。在100μmol/L已達(dá)到作用濃度平臺(tái)期。 3、50/amol/L 及以上濃度的白藜蘆醇對(duì)Hela 細(xì)胞TUNEL實(shí)驗(yàn)染色觀察,發(fā)現(xiàn)視野內(nèi)Hela細(xì)胞有明顯的凋亡陽性反應(yīng)。
4、隨時(shí)間延長凋亡率增加。 4、白藜蘆醇處理Hela 細(xì)胞后HE染色、吉姆薩染色法均以倒置顯微鏡觀察到細(xì)胞凋亡的典型形態(tài)學(xué)特征,且隨濃度增加凋亡細(xì)胞增加。 5、白藜蘆醇處理Hela 細(xì)胞經(jīng)免疫組化SABC法檢測隨著作用時(shí)間的延長上調(diào)Caspase-3蛋白表達(dá),下調(diào)Survivin蛋白表達(dá)。 6、通過體外侵襲實(shí)驗(yàn)(transwell小室)得出,12.5μmol/L 濃度的白藜蘆醇對(duì)Hela細(xì)胞即有一定的抑制侵襲作用。
5、7、50μmol/L 白藜蘆醇處理Hela 細(xì)胞免疫組化SABC法檢測與對(duì)照組相比隨著作用時(shí)間的延長β-catenin 蛋白在細(xì)胞核及細(xì)胞漿核內(nèi)表達(dá)減弱,細(xì)胞膜表達(dá)增強(qiáng)。 結(jié)論: 1、達(dá)到一定濃度的白藜蘆醇就能夠?qū)θ藢m頸癌Hela 細(xì)胞產(chǎn)生明顯的抑制增殖作用,在一定濃度范圍內(nèi)呈時(shí)間劑量依賴。本實(shí)驗(yàn)中相對(duì)較低濃度的白藜蘆醇抑制作用隨時(shí)間的延長而漸漸明顯,較高濃度的白藜蘆醇12h之內(nèi)就顯示出強(qiáng)烈的抑制增殖作用,但24h-48
6、h較12h-24h 增殖抑制率的增加程度的有所減少。 2、通過TUNEL檢測法及對(duì)Res處理的Hela 細(xì)胞形態(tài)的觀察學(xué)也證實(shí)白藜蘆醇在對(duì)Hela細(xì)胞在抑制其增殖的同時(shí)誘導(dǎo)其凋亡。Res對(duì)Hela細(xì)胞的凋亡作用很有可能是通過下調(diào)Survivin蛋白表達(dá),上調(diào)Caspase-3 蛋白的表達(dá)來誘導(dǎo)人宮頸癌Hela細(xì)胞的凋亡,從而抑制腫瘤的生長。 3、本實(shí)驗(yàn)中低濃度的白藜蘆醇即可抑制人宮頸癌Hela細(xì)胞的侵襲活性。其可能通過下
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