ΔNp63基因?qū)m頸癌HeLa細胞侵襲作用的研究.pdf

1、中國圖書分類法單位代碼：10660分類號：R737.33學號：S080049貴陽醫(yī)學院貴陽醫(yī)學院2011屆碩士學位論文屆碩士學位論文ΔNp63基因?qū)m頸癌HeLa細胞侵襲作用的研究研究生：鄒家瓊導師：羅昭遜年級：2008級專業(yè)：臨床檢驗診斷學2011年5月5日2011屆碩士研究生畢業(yè)論文ΔNp63基因?qū)m頸癌HeLa細胞侵襲作用的研究1ΔNp63基因?qū)m頸癌HeLa細胞侵襲作用的研究專業(yè)名稱：臨床檢驗診斷學研究生：鄒家瓊導師：羅昭遜摘要

2、目的：研究ΔNp63基因在HeLa細胞中的表達；研究抑制ΔNp63基因表達后宮頸癌HeLa細胞侵襲、轉(zhuǎn)移能力的改變；探討ΔNp63基因在HeLa細胞侵襲、轉(zhuǎn)移作用中與Z01的關(guān)系。方法：1）擴增并提取ΔNp63shRNA質(zhì)粒做序列鑒定，通過脂質(zhì)體法介導ΔNp63shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染宮頸癌HeLa細胞，采用G418篩選出穩(wěn)定表達ΔNp63shRNA質(zhì)粒的HeLa細胞，采用Westernblot檢測干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染前后HeLa細胞中ΔNp63蛋白

3、的表達；2）采用同質(zhì)粘附實驗、異質(zhì)粘附實驗、Transwell侵襲實驗及細胞劃痕實驗檢測HeLa細胞侵襲、遷移能力的改變。3）利用激光共聚焦掃描顯微鏡及Westernblot實驗技術(shù)檢測HeLa細胞中ΔNp63干擾前后ΔNp63蛋白與ZO1蛋白表達的改變；采用實時熒光定量PCR儀檢測在ΔNp63基因干擾前后HeLa細胞中ΔNp63mRNA與ZO1mRNA量的變化；探討ΔNp63與ZO1在細胞侵襲、轉(zhuǎn)移中的相互作用及關(guān)系。結(jié)果：1）成功擴

4、增、純化ΔNp63shRNA質(zhì)粒，通過序列檢測鑒定證明ΔNp63shRNA質(zhì)粒序列與設(shè)計序列相吻合，確定ΔNp63shRNA表達質(zhì)粒在48h時的轉(zhuǎn)染效率為最佳，通過G418（700μgml）篩選3周得到穩(wěn)定表達ΔNp63shRNA質(zhì)粒的HeLa細胞，Westernblot實驗顯示干擾質(zhì)粒組的ΔNp63蛋白表達與陰性質(zhì)粒組及空白組比較明顯降低（p0.05），而在24h時干擾質(zhì)粒組與空白組和陰性質(zhì)粒組比較細胞遷移數(shù)出現(xiàn)明顯降低，差異有統(tǒng)計學