槲皮素對宮頸癌Hela細胞放療增敏及抑制轉移的作用研究.pdf

1、目的:探討槲皮素對宮頸癌Hela細胞的輻射增敏效應及抑制侵襲、轉移的作用，探討輻射增敏作用與給藥時序、藥物濃度的影響，探討槲皮素放射增敏及抑制轉移可能的機制。
　　方法:(1) MTT法檢測槲皮素單獨作用以及12Gy的X射線與槲皮素聯(lián)合作用時對Hela細胞增殖的抑制作用，繪制出細胞抑制率曲線，計算槲皮素對Hela細胞作用的IC50值。(2)克隆形成實驗觀察不同給藥時序、不同藥物濃度的槲皮素對宮頸癌Hela細胞的放療增敏作用，比較單

2、獨放射以及藥物與輻射聯(lián)合后細胞的成瘤能力，確定最佳給藥時序并觀察藥物濃度對放射增敏的影響。(3)流式細胞法檢測槲皮素、放射線單獨以及聯(lián)合作用后Hela細胞的周期分布及凋亡率情況。(4)光鏡及DAPI染色分別觀察不同處理后Hela細胞的凋亡變化。(5)劃痕實驗和Transwell體外侵襲實驗分別觀察射線及槲皮素對Hela細胞的遷移和侵襲能力的影響。(6)Western-blot法檢測槲皮素、放射線單獨以及聯(lián)合應用后Hela細胞中Bcl-2

3、、Bax、VEGF、MMP-9蛋白的表達。
　　結果:(1)不同濃度的槲皮素對Hela細胞均呈量效性和時效性的生長抑制作用;不同濃度槲皮素聯(lián)合12Gy劑量射線共同作用后，Hela細胞的增殖進一步受到不同程度的抑制，并具有濃度和時間依賴性。計算出24小時槲皮素對Hela細胞的IC50值約為120μ moL/L?？紤]臨床常規(guī)放療劑量的實用性及參考文獻資料，后續(xù)試驗中選取的放療劑量為4Gy，槲皮素選取高、低兩個濃度進行比較（20％的IC

4、50值和IC50值）。(2)在先藥后放及先放后藥兩種不同時序下，單獨放射與射線聯(lián)合槲皮素作用，均能抑制Hela細胞集落形成，聯(lián)合組抑制作用更加明顯，先放后藥比先藥后放時序的抑制效果更加具有優(yōu)勢，因此，在后續(xù)試驗中采用先放后藥作用時序。(3)槲皮素與放射線均能使細胞周期阻滯于放射敏感的G2/M期，放射線與槲皮素聯(lián)合作用比單獨作用效果更加顯著。(4)光鏡下觀察射線單獨作用后，細胞的形態(tài)無明顯的變化，槲皮素單獨作用后，細胞間隙變寬，細胞形態(tài)不

5、規(guī)整，呈不同程度的皺縮，槲皮素聯(lián)合射線處理后，細胞形態(tài)變化更加明顯，間隙進一步增寬，細胞變圓、皺縮，且高濃度槲皮素作用的細胞形態(tài)改變更加顯著;DAPI染色后，射線及槲皮素均可引起細胞核不同程度的皺縮，二者合用后，大量細胞核皺縮、碎裂，高濃度藥物作用細胞核變化更加顯著。(5)射線照射24h后細胞遷移與侵襲能力增加，槲皮素對HeLa細胞的遷移與侵襲有抑制作用，槲皮素與射線共同處理細胞后，與空白組及單放組比較仍具有明顯的抑制遷移作用。(6)W

6、estern blot法檢測各處理組Bax、Bcl-2、VEGF、MMP-9蛋白表達情況，結果表明槲皮素單藥，以及聯(lián)合放射線均能升高Bax蛋白的表達，降低Bcl-2蛋白的表達;射線單獨作用后VEGF、MMP-9蛋白表達在一定時間內略有增加，槲皮素處理后VEGF、MMP-9蛋白表達降低，二者共同處理后VEGF、MMP-9蛋白表達較空白組與單放組降低。
　　結論:(1)槲皮素及X射線均能抑制Hela細胞增殖。(2)槲皮素對Hela細胞