拓撲替康、順鉑和泰素對宮頸癌細胞HeLa的抑制及放射增敏作用.pdf

1、目的:拓撲替康（TPT）通過與拓撲異構酶-Ⅰ結合并抑制其功能，導致DNA雙鏈斷裂進而誘導腫瘤細胞凋亡。目前拓撲替康作為一個有效的化療藥物和放療增敏劑用于肺癌、頭頸部鱗狀細胞癌以及卵巢癌的治療。雖不少臨床研究報道拓撲替康用于宮頸癌化療效果不錯，但用于晚期宮頸癌同步放化療的研究較少。本研究擬設計體外實驗，研究拓撲替康對宮頸癌細胞HeLa的殺傷作用，分析拓撲替康作為放射增敏劑在殺傷腫瘤細胞中發(fā)揮的作用；同時與順鉑和泰素的放射增敏作用進行比較

2、 方法: 1.培養(yǎng)人子宮頸癌HeLa細胞，將處于對數(shù)生長期的細胞用于實驗； 2.不同濃度的拓撲替康、順鉑和泰素作用于宮頸癌HeLa細胞，不同時間后(24小時，48小時和72小時)，應用噻唑藍法（MTT法）檢測不同時間組、濃度組吸光光度值，研究三種化療藥物對宮頸癌HeLa細胞增殖能力的影響，分析抑制作用與時間、劑量的關系； 3.計算三種藥物24小時 50％抑制濃度（IC50）用于后續(xù)實驗； 4.將He

3、La細胞分為 a.空白對照組、b.單放射組、c.單化療組和d.放射增敏組，對應給予相關處理后，采用Annexin V/碘化丙啶雙染色法，流式細胞儀檢測各組細胞凋亡情況，分析拓撲替康、順鉑和泰素的放射增敏作用； 5.將HeLa細胞分為空白對照組、單放射組、單化療組和放射增敏組，單化療組和放射增敏組予拓撲替康、順鉑和泰素作用24小時和48小時后，將單放射組和放射增敏組予以放射線輻射，應用細胞克隆形成法檢測HeLa細胞增殖能力情況，從

4、而分析各化療藥物聯(lián)合放射線輻射對腫瘤細胞的殺傷作用； 6.應用單擊多靶模型擬合細胞存活曲線，計算各種參數(shù)以分析各化療藥物聯(lián)合放射線輻射對腫瘤細胞的抑制作用，并計算拓撲替康、順鉑和泰素24小時和48小時時放射增敏比。 結果: 1.拓撲替康、順鉑和泰素對HeLa細胞增殖的抑制程度，隨作用時間延長和藥物濃度增加，呈時間和濃度依賴性。拓撲替康不同作用時間（24小時、48小時、72小時）的IC50分別為8.0 μg/ml，

5、2.6 μg/ml和0.8 μg/ml；順鉑的IC50分別為2.37 μg/ml，0.67 μg/ml和0.11 μg/ml；泰素的IC50分別為0.26 μg/ml，0.09 μg/ml和0.02μg/ml。 2.泰素24小時 IC50僅為泰素血峰值濃度（PPC）的2.0％（0.26:13.6）；而順鉑24小時 IC50為其PPC的62.4％（2.37:3.8），拓撲替康24小時 IC50為其PPC 10.7倍的(8:0.75

6、)。 3.流式細胞儀檢測對照組中凋亡細胞比例為4.63％，單放射組細胞凋亡率為14.4％，拓撲替康單化療組細胞凋亡率為45.7％，放射增敏組為70.2％；順鉑單化療組細胞凋亡率為43.9％，放射增敏組為78.9％；泰素單化療組細胞凋亡率為51.7％，放射增敏組為65.3％。卡方檢驗示三種化療藥物的放射增敏組腫瘤細胞凋亡率均明顯高于單放射組和單化療組。 4.細胞克隆形成法表明三種化療藥物作用24小時和48小時后聯(lián)合放射線輻

7、射，對HeLa細胞的殺傷作用明顯增強，提示拓撲替康、順鉑和泰素具有放射增敏作用，且化療藥物作用時間越長增敏效果越明顯。 5. 應用SigmaPlot軟件按單擊多靶模型 SF=1－(1－e-D/Do)N擬合細胞存活曲線，計算放射輻射參數(shù)及放射增敏比。拓撲替康放射增敏24小時組和放射增敏48小時組放射增敏比分別為1.167和1.344；順鉑放射增敏組的放射增敏比分別為1.314和1.538；泰素放射增敏組的放射增敏比分別為1.076

8、和1.316；順鉑放射增敏比最高，泰素最低。 結論:拓撲替康、順鉑和泰素對宮頸癌HeLa細胞抑制作用十分明顯，都呈時間依賴性和濃度依賴性。對比三種藥物血峰值濃度：拓撲替康24小時 IC50與其PPC的比值最大（10.7），泰素24小時 IC50與其PPC的比值最?。?.0％）。這提示泰素體外對宮頸癌HeLa細胞的抗腫瘤作用最強，順鉑次之，而拓撲替康體外抗HeLa細胞作用比較溫和。進一步放射增敏實驗中，放射增敏組放射增敏比均大于1