URI對宮頸癌細胞順鉑耐藥性及遷移能力的影響.pdf

1、研究背景:
　　宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，其死亡率占女性腫瘤的第二位。盡管早期手術(shù)療效顯著，但宮頸癌容易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是患者死亡的主要原因。順鉑是宮頸癌復(fù)發(fā)的首選化療藥物，但其效率不高。因此，探索宮頸癌的發(fā)病、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和化療耐藥機制是迫切需要解決的問題。宮頸癌的發(fā)生發(fā)展與人類乳頭瘤病毒(HPV)感染密切相關(guān)，并涉及到PI3K/AKT/mTOR通路的激活。但由于其腫瘤異質(zhì)性，可能還涉及到多種腫瘤標記物和信號通路。URI是前

2、折疊素家族非傳統(tǒng)成員，是mTOR信號通路的一個轉(zhuǎn)錄因子。研究表明URI與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。我們前期的研究表明在癌前病變CIN和浸潤性宮頸癌中URI表達上調(diào)。值得關(guān)注的是URI和HPV均與mTOR通路的激活有關(guān)，但兩者的內(nèi)在聯(lián)系，以及與宮頸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)聯(lián)性和潛在機制尚缺乏系統(tǒng)的研究。
　　研究目的:
　　通過干預(yù)人HPV陽性和陰性宮頸癌細胞系URI的表達，研究URI對宮頸癌細胞順鉑耐藥性和腫瘤細胞遷移/侵襲能力的影響及

3、機制，為URI的癌基因特性提供新的依據(jù)。
　　研究方法:
　　(1)應(yīng)用基因轉(zhuǎn)染和siRNA沉默技術(shù)在人HPV陽性(CaSki)和陰性(C33A)宮頸癌細胞株中過表達或敲低URI，并采用RT-PCR、qRT-PCR以及Western blot等多種方法檢測其表達水平。
　　(2)用CCK-8試劑盒分別檢測上述URI干預(yù)表達的細胞的活力。
　　(3)流式細胞術(shù)檢測URI干預(yù)后宮頸癌細胞的凋亡以及順鉑處理條件下細胞的

4、增殖與凋亡。
　　(4)劃痕實驗和Transwell小室實驗檢測URI干預(yù)后宮頸癌的遷移/侵襲能力，qRT-PCR檢測EMT相關(guān)標志物的表達。
　　研究結(jié)果:
　　(1)URI siRNA干擾后宮頸癌細胞中URI表達水平降低，而pCMV6-URI質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染可致URI表達增高，表明URI在宮頸癌細胞中干預(yù)成功。
　　(2)在C33A和CaSki中，過表達URI可以促進細胞生長，而敲低細胞URI表達抑制細胞增殖。<

5、br>　　(3)URI的過表達增加了細胞對順鉑的抵抗，而URI的干擾可促進順鉑作用下的細胞凋亡。
　　(4)URI通過上調(diào)EMT標志物Vimentin，促進宮頸癌細胞遷移/侵襲。
　　研究結(jié)論:
　　URI促進人HPV陽性和陰性宮頸癌細胞的增殖，并增加宮頸癌細胞對順鉑的耐藥性，URI還可能通過上調(diào)Vimentin，促進上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)，增強宮頸癌細胞遷移/侵襲的能力，從而在宮頸癌的轉(zhuǎn)移中起作用。在兩株細胞中，U