As-,2-O-,3-對人宮頸癌Hela細胞的放射增敏作用.pdf

1、目的： 觀察三氧化二砷(As2O3)對人宮頸癌Hela細胞放射增敏的效應(yīng)，探討其對官頸癌放射增敏作用的機制，為As2O3作為官頸癌的放射增敏劑應(yīng)用于臨床提供實驗依據(jù)。 方法： MTT法測定人宮頸癌Hela細胞對As2O3藥物的敏感性，計算細胞抑制率=(1-實驗組吸光度值/對照組吸光度值)×100％，實驗重復三遍，取平均值，結(jié)果以藥物濃度為橫坐標、以細胞抑制率為縱坐標，通過Excel軟件繪制細胞生長抑制曲線，通過I

2、D50計算軟件計算出藥物作用48h后的半數(shù)致死劑量(ID50)。 集落形成法觀察20％ID50的As2O3對Hela細胞的放射增敏作用，計數(shù)含50個細胞以上的集落數(shù)，求出細胞存活分數(shù)(細胞存活率)，細胞存活率的計算方法為：處理組集落形成率/對照組集落形成率，實驗重復三遍，取平均值，結(jié)果以放射劑量為橫坐標、以細胞存活率為縱坐標，采用“多靶單擊模型”通過SPSS13.0軟件擬合細胞存活曲線，計算放射增敏比(SER)。 流式細

3、胞儀測定細胞周期，分為空白對照組(空白組)、20％ID50的As2O3組(單藥組)、單純放射組(單放組)、放射+20％IDso的As2O3組(藥放組)，每個組設(shè)3個平行樣本，于25cm2的培養(yǎng)瓶中接種1×105個細胞。收集各組處理后的細胞進行固定、染色，流式細胞儀檢測細胞周期的分布，用Multicycle軟件進行分析。 免疫細胞化學法及western blotting法(按試劑盒說明書操作)檢測空白組、單藥組、單放組、藥放組在藥

4、物作用后的p21Wafl/Cipl及Bcl-2兩種蛋白表達變化情況。 結(jié)果： 1.As2O3對人宮頸癌Hela細胞的生長抑制作用隨藥物濃度的增加而增強，48h時的半數(shù)致死劑量(ID50)值為10.86μmol/L。 2.As2O3對人宮頸癌Hela細胞有放射增敏作用，藥放組的細胞存活率低于單放組，其平均致死劑量(Do)及準域劑量(Dq)均小于單放組(Do：2.49 Gy vs 3.45 Gy，Dq：1.03 Gy

5、 vs 1.89 Gy)，放射增敏比(SER)為1.39。 3.空白組、單藥組、單放組、藥放組在藥物作用48h后G2/M期的細胞比例分別為12.45±1.88、18.91±1.65、18.42±2.29、31.07±6.66，統(tǒng)計分析表明單放及單藥均能提高G2/M期的細胞比例(P<0.05，P=0.012，P=0.007)，放射及As203藥物聯(lián)合則G2/M期的細胞比例提高更顯著(P<0.01，P=0.000)。 4.免

6、疫細胞化學法及Western blot檢測各組p21waf1/cip1及Bcl-2兩種蛋白表達情況基本一致，結(jié)果表明可知放射及藥物均能提高p21waf1/cip1的表達(P<0.05)，放射及As203藥物聯(lián)合則p21waf1/cip1表達更高(P<0.01)；放射及藥物均能降低Bcl-2的表達(P<0.05)，放射及As2O3藥物聯(lián)合則Bcl-2表達更低(P<0.01)。 結(jié)論： 1.As203對人宮頸癌Hela細胞具