β-欖香烯對宮頸癌細胞株HeLa體外放射增敏及作用機制的研究.pdf

1、放射治療是宮頸癌治療的主要手段之一。由于腫瘤細胞的生物學特性及局部微環(huán)境等因素的影響往往致放射治療療效不盡如人意,因此,尋找有效的宮頸癌放射增敏劑具有重要的臨床意義。
　　近年來,人們發(fā)現某些中藥具有放射增敏效應。欖香烯是從姜科植物溫莪術中提取的非細胞毒性抗腫瘤藥,具有廣譜抗腫瘤作用,毒副作用小,能提高腫瘤放射增敏效應。過去對欖香烯抗癌作用機制的研究僅限于欖香烯對腫瘤細胞增殖、分化和凋亡、免疫原性等的影響,關于其作用靶點研究很少報

2、道。
　　本研究選用低細胞毒性的β-欖香烯作用于宮頸癌HeLa細胞,觀察β-欖香烯對HeLa細胞體外放射增敏作用,初步探討放射增敏作用靶點,為β-欖香烯放射增敏劑臨床應用提供理論依據。
　　目的:研究β-欖香烯對人宮頸癌HeLa細胞株放射敏感性的影響,探討其作用與CDK1、cyclin B1、bcl-2及P53表達的關系。
　　方法:本實驗采用人宮頸癌HeLa細胞作為研究對象,實驗組用含不同濃度(10μg/ml、20μ

3、g/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml、320μg/ml)β-欖香烯RPMI-1640培養(yǎng)液進行培養(yǎng),在不同照射劑量(2Gy、4Gy、6Gy、8Gy、10Gy)下直線加速器6MV-X線照射,采用MTT法測定不同濃度β-欖香烯對HeLa細胞的生長抑制率;克隆形成率觀察β-欖香烯對HeLa細胞的放射增敏作用;熒光定量RT-PCR法檢測不同劑量β-欖香烯(30μg/ml、45μg/ml)作用24h、48h后CDK1、cyc

4、lin B1、bcl-2及P53的表達情況。
　　結果:
　　1、β-欖香烯作用HeLa細胞24h的半數抑制濃度(IC50)為112.6μg/ml,β-欖香烯對HeLa細胞有顯著抑制作用,隨著藥物濃度的增大,細胞的抑制率逐漸增高(p<0.05)。
　　2、低細胞毒濃度的β-欖香烯(30μg/ml)對HeLa細胞進行放射敏感性實驗,結果提示:相同劑量下,30μg/mlβ-欖香烯聯(lián)合放療組A570nm值均較單純放療組降低。

5、統(tǒng)計學分析組間有顯著性差異(P<0.05)。初步判斷β-欖香烯對HeLa細胞有放射增敏作用。
　　3、不同劑量β-欖香烯(30μg/ml和45μg/ml)作用HeLa細胞24h后細胞克隆數及存活率的檢測,結果顯示:30μg/ml、45μg/mlβ-欖香烯作用24h后聯(lián)合上述照射劑量放療組較單純放療組細胞克隆數明顯下降,統(tǒng)計學分析各組間有顯著性差異(P<0.05);且30μg/ml、45μg/ml兩濃度組之間亦有顯著性差異(p<0.

6、05)。因此,克隆形成率進一步證明β-欖香烯在低細胞毒性濃度下對HeLa細胞有放射增敏作用,且隨藥物濃度逐漸增加,放射增敏作用逐漸增強。
　　4、30μg/ml與45μg/mlβ-欖香烯乳作用24h、48h后,熒光定量PCR法測定CDK1、Cyclin B1、bcl-2及p53的表達。結果顯示,β-欖香烯單獨作用HeLa細胞后,可下調細胞周期分子CDK1、Cyclin B1,下調細胞凋亡分子bcl-2以及上調p53的表達。

7、　　結論:
　　1.β-欖香烯乳對Hela細胞的增殖有明顯的抑制作用,其IC50值、IC20值、IC10值分別為112.6μg/ml、45.34μg/ml、29.56μg/ml,其抑制作用與劑量呈正相關性。
　　2.β-欖香烯乳在低細胞毒性劑量下對Hela細胞有放射增敏作用,并隨劑量的增加而增強,其增敏作用與劑量呈正相關性。
　　3.β-欖香烯作用Hela細胞,可下調Cyclin B1、bcl-2及上調p53的表達。由