P53-靶向小分子Rita對(duì)宮頸癌原代細(xì)胞體外放射增敏的初步研究.pdf

1、目的:
　　建立穩(wěn)定的宮頸癌體外原代細(xì)胞，用P53靶向小分子藥Rita進(jìn)行體外細(xì)胞放射增敏實(shí)驗(yàn)，為臨床放療的發(fā)展提供理論指導(dǎo)，為建立p53靶向小分子輔助宮頸癌放療的提供新策略。
　　方法:
　　本實(shí)驗(yàn)分為兩部分:第一部分為腫瘤組織的體外培養(yǎng)及鑒定，包括:(1)形態(tài)學(xué)觀察:倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)，看是否具有腫瘤細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)。(2)組織來源:通過免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定細(xì)胞角蛋白來判斷細(xì)胞是否符合來源于上皮組織。(3)端粒

2、酶活性測定:通過測得細(xì)胞端粒酶的活性來判斷培養(yǎng)的細(xì)胞為癌細(xì)胞。(4) HPV-E6的測定:通過測得宮頸癌特有標(biāo)志蛋白HPV-E6來判斷培養(yǎng)的細(xì)胞為宮頸癌細(xì)胞(5)細(xì)胞生長特性:采用MTT法繪制細(xì)胞的生長曲線。第二部分應(yīng)用MTT法測定不同時(shí)間、不同濃度Rita對(duì)宮頸癌細(xì)胞的增殖抑制作用，求出半數(shù)抑制濃度(IC50)。將宮頸癌細(xì)胞分為:空白對(duì)照組、照射組、藥物組、藥物與照射聯(lián)合組，應(yīng)用CCK-8法研究Rita與放射聯(lián)合效應(yīng)，利用“多靶單擊”

3、數(shù)學(xué)模型擬合生物存活曲線，獲得平均致死劑量、準(zhǔn)閾劑量、放射增敏比(SER)等參數(shù)，進(jìn)行效應(yīng)評(píng)估。將宮頸癌細(xì)胞分為:空白對(duì)照組、照射組、藥物組、藥物與照射聯(lián)合組.Rita作用細(xì)胞48h后，流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡率的變化。
　　結(jié)果:
　　宮頸癌細(xì)胞在體外培養(yǎng)初步成功。倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞呈梭形及不規(guī)則多角形，有聚集生長趨勢;符合癌細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征;細(xì)胞角蛋白鑒定胞漿黃染，CK陽性，證明癌細(xì)胞起源于上皮組織，細(xì)胞端粒酶活性及HP

4、V-E6檢測陽性，可診斷為宮頸癌細(xì)胞。Rita作用后宮頸癌細(xì)胞生長增殖受到抑制，濃度高細(xì)胞抑制率大，時(shí)間長細(xì)胞存活率低，作用48小時(shí)IC50為18.5umol/L，IC20為7.5umol/L。Rita作用宮頸癌細(xì)胞48h后聯(lián)合放射的放射增敏比(SER)＞1。Rita作用宮頸癌細(xì)胞后流式細(xì)胞儀檢測，其藥物組和放射組凋亡率較對(duì)照組細(xì)胞升高，分別為10.397±0.264，14.497±0.836.而聯(lián)合組中，凋亡率升高更為顯著，可達(dá)20.