青蒿琥酯對宮頸癌HeLa和Siha細胞裸鼠移植瘤放射增敏的實驗研究.pdf

1、目的：研究青蒿琥酯(Artesunate)對 p53突變型宮頸癌 HeLa細胞及p53野生型宮頸癌Siha細胞裸鼠移植瘤的放射增敏作用,并探討其作用機理的差異性,為青蒿琥酯作為腫瘤放療增敏藥物提供實驗依據。
　　 方法：分別以濃度為1～2×107個／ml及1～2×108個／ml的 HeLa和Siha細胞懸液接種于裸鼠右大腿根部皮下建立宮頸癌 HeLa和 Siha細胞裸鼠移植瘤模型,待移植瘤平均體積增至大約(5mm×5mm×5mm

2、),,隨機分為:對照組、單藥組(青蒿琥酯組)、單照組(10Gy)、藥物+照射組(青蒿琥酯+10Gy)。對照組與單照組:每只裸鼠腹腔注射生理鹽水每次0.2ml,1次／d,連續(xù)7d,單藥組與藥物+照射組每只裸鼠予以腹腔注射青蒿琥酯,將青蒿琥酯母液(50mg／ml)注射前用生理鹽水稀釋成10mg／ml,每只按100mg／kg／d量給予,每次0.2ml,1次／d,連續(xù)7d,第7d在給藥結束后1h將單照組與藥物+照射組移植瘤局部單次10Gy60C

3、oγ射線照射,照后觀察14d,14d后剝瘤,稱瘤重,測量移植瘤體積,計算抑瘤率及腫瘤體積抑制率,繪制腫瘤生長曲線。流式細胞儀檢測移植瘤細胞周期,Western Blot法檢測移植瘤組織中cyclinB1、cdc2、wee1蛋白的表達,并對移植瘤標本進行蘇木精-伊紅染色,免疫組化 S-P法測定移植瘤組織微血管密度(MVD),TUNEL法檢測移植瘤組織中腫瘤細胞凋亡。
　　 結果：(1)HeLa細胞接種10-15天后可以成功地建立皮

4、下移植瘤模型,成瘤率100％,Siha細胞接種15-20天后可以成功地建立皮下移植瘤模型,成瘤率100％；(2)青蒿琥酯對HeLa細胞裸鼠移植瘤有顯著的放射增敏作用,藥物+照射組瘤重(0.64±0.28)g明顯低于單照組(1.31±0.44)g(P<0.05),且抑瘤率67.67％高于單照組34.09％,差異顯著；處理后移植瘤平均體積藥物+照射組(579.18±120.36)mm3顯著低于單照組(979.36±289.00)mm3(P<

5、0.05),腫瘤體積抑制率61.59％明顯高于單照組35.05％；青蒿琥酯對Siha細胞裸鼠移植瘤無明顯的放射增敏作用,藥物+照射組瘤重(0.82±0.22)g及移植瘤平均體積(657.43±100.52)mm3同單照組瘤重(0.88±0.35)g及移植瘤平均體積(717.20±148.55)mm3相比,差異無統(tǒng)計學意義。(3)HE染色病理切片顯示 HeLa細胞裸鼠移植瘤藥物+照射組細胞凋亡較單照組明顯增多,而 Siha細胞裸鼠移植瘤藥

6、物+照射組細胞凋亡同單照組相比無明顯改變。(4)TUNEL法檢測腫瘤細胞凋亡結果顯示,HeLa細胞裸鼠移植瘤藥物+照射組腫瘤細胞凋亡指數(50.30±5.91)％較單照組(30.20±5.09)％顯著增加(P<0.05),而Siha細胞裸鼠移植瘤藥物+照射組腫瘤細胞凋亡指數(38.80±5.25)％同單照組(36.60±5.52)％相比無明顯改變。(5)免疫組化S-P法檢測移植瘤標本微血管密度結果顯示:對于 HeLa細胞裸鼠移植瘤,藥物

7、+照射組移植瘤的微血管密度(9.75±2.99)顯著低于單照組(24.25±5.74)(P<0.05)；對于Siha細胞裸鼠移植瘤,藥物+照射組移植瘤的微血管密度(17.25±4.35)同單照組(20.25±4.27)相比無明顯改變。(6)流式細胞儀檢測細胞周期發(fā)現(xiàn):HeLa細胞裸鼠移植瘤藥物+照射組移植瘤細胞的G2／M期細胞比例(14.93±2.47)％較單照組移植瘤細胞的 G2／M期細胞比例(28.17±4.58)％下降(P<0.0

8、5),藥物+照射組移植瘤細胞的 G0／G1期細胞比例(50.84±1.12)％較單照組移植瘤細胞的 G0／G1期細胞比例(41.32±3.84)％上升(P<0.05),而Siha細胞裸鼠移植瘤細胞的G0／G1期、S期、G2／M期細胞比例均無明顯變化。(7)Western Blot檢測發(fā)現(xiàn),HeLa細胞裸鼠移植瘤藥物+照射組cyclinB1蛋白表達水平較單照組明顯升高,wee1蛋白表達水平較單照組明顯降低,cdc2蛋白在各處理組中的表達與

9、對照組無明顯差異。Siha細胞裸鼠移植瘤藥物+照射組cyclinB1、cdc2、wee1蛋白表達水平同單照組相比均無明顯變化。
　　 結論：(1)青蒿琥酯對p53突變型宮頸癌 HeLa細胞裸鼠移植瘤具有放射增敏作用,能明顯抑制60Coγ射線照射后 HeLa細胞裸鼠移植瘤的生長,而對p53野生型Siha細胞裸鼠移植瘤的放射增敏作用不明顯；(2)青蒿琥酯能增強由60Coγ射線所誘導的p53突變型 HeLa細胞裸鼠移植瘤的細胞凋亡,而

10、對p53野生型Siha細胞裸鼠移植瘤不存在這種作用；(3)青蒿琥酯聯(lián)合60Coγ射線能抑制p53突變型 HeLa細胞裸鼠移植瘤的微血管生成,而對p53野生型Siha細胞裸鼠移植瘤受照后的微血管生成無影響；(4)青蒿琥酯能抑制p53突變型宮頸癌 HeLa細胞裸鼠移植瘤因60Coγ射線照射所引起的 G2／M期阻滯,而不影響p53野生型宮頸癌Siha細胞裸鼠移植瘤照射后的細胞周期進程；(5)青蒿琥酯可通過對 G2期調控關鍵因子 cyclinB