三氧化二砷和槲皮素對宮頸癌Hela細胞免疫抑制作用的影響.pdf

1、目的：中藥是我國獨具優(yōu)勢的傳統(tǒng)醫(yī)藥資源，子宮頸癌是嚴重威脅婦女健康的重大疾病，僅次于乳腺癌的第二個最常見的惡性腫瘤，目前具有年輕化趨勢。宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展與HPV感染密切相關。機體免疫系統(tǒng)能產(chǎn)生抗腫瘤免疫應答，但是，腫瘤仍能在機體內(nèi)進行性生長，這與腫瘤可逃避免疫監(jiān)視密切相關，其中腫瘤免疫抑制作用是其免疫逃逸機制的重要方面。研究發(fā)現(xiàn)，有些腫瘤細胞的培養(yǎng)上清確有免疫抑制作用，而有些抗瘤中藥也確有逆轉(zhuǎn)腫瘤上清免疫抑制的作用。CD4+CD25+

2、調(diào)節(jié)性T淋巴細胞(Treg)具有免疫無能性及免疫抑制性，是腫瘤免疫抑制的重要途徑之一。文獻報道宮頸癌患者外周血中CD4+CD25+Treg顯著升高，三氧化二砷和槲皮素對宮頸癌Hela細胞的抗腫瘤的研究已有報道，但是兩種中藥是否有逆轉(zhuǎn)腫瘤培養(yǎng)上清免疫抑制作用未見報道，為此，體外研究了三氧化二砷和槲皮素對宮頸癌Hela細胞培養(yǎng)上清免疫抑制功能的影響，為研究中藥抗瘤新機制和開辟篩選抗瘤中藥新途徑進一步提供實驗依據(jù)。 方法： 1

3、.各種免疫上清的制備分別制備藥物作用一定時間后洗去藥物，再培養(yǎng)不同時間的腫瘤細胞培養(yǎng)上清。其中，三氧化二砷和槲皮素作用宮頸癌Hela細胞48小時后洗去藥物，加入新鮮培養(yǎng)液，重新調(diào)整細胞濃度后，再培養(yǎng)48小時的上清分別稱為As-S，Qu-S，相應的以完全培養(yǎng)液代替藥物同步處理所獲的對照培養(yǎng)上清稱為Control-S。 2.用MTT法檢測兩種中藥培養(yǎng)上清對PHA誘導的外周血淋巴細胞增殖及CTL細胞毒作用的影響。 3.用流式細

4、胞術分析兩種中藥培養(yǎng)上清對外周血T淋巴細胞亞群表型的影響。 4.定量ELISA檢測兩種中藥培養(yǎng)上清TGF-β1、VEGF、IL-4、IL-6和IL-10五種免疫抑制因子的含量。 5.并對三氧化二砷和槲皮素下調(diào)宮頸癌Hela細胞免疫抑制因子分泌與上清免疫抑制功能之間的關系進行分析。 6.統(tǒng)計學方法：所有數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行分析，實驗結(jié)果用-x±s表示，兩兩比較用q檢驗；相關分析行直線回歸及直線相關

5、分析；顯著性檢驗水準α=0.05，P<0.05判定為具有統(tǒng)計學差異。 結(jié)果： 1.三氧化二砷作用后的Hela細胞培養(yǎng)上清對外周血淋巴細胞免疫功能的影響 1.1三氧化二砷作用后的Hela細胞培養(yǎng)上清較未作用的培養(yǎng)上清對PHA誘導的外周血淋巴細胞增殖、CTL細胞毒作用及CD4+CD25-T細胞的抑制作用均顯著降低，而對CD4+CD25+T細胞的抑制作用顯著增強。 1.2三氧化二砷作用后的Hela細胞培養(yǎng)上清較

6、未作用的培養(yǎng)上清中TGF-β1、IL-4和IL-10含量顯著降低，而VEGF及IL-6含量無明顯改變。 1.3其中TGF-β1與抑制PHA誘導的T淋巴細胞增殖和CD25+表達正相關，與CD4+CD25+T細胞表達也成正相關；IL-4與CD4+CD25-T細胞表達及CTL細胞毒作用抑制正相關；VEGF與CTL細胞毒作用抑制亦正相關。 2.槲皮素作用后的Hela細胞培養(yǎng)上清對外周血淋巴細胞免疫功能的影響 2.1槲皮素

7、作用后的Hela細胞培養(yǎng)上清較未作用的培養(yǎng)上清對PHA誘導的外周血淋巴細胞增殖、CTL細胞毒作用及CD3+、CD4+、CD25+及CD4+CD25-T細胞表達的抑制作用均顯著降低，而對人外周血淋巴細胞CD4+CD25+表達的抑制明顯增高。 2.2槲皮素作用后的Hela細胞培養(yǎng)上清中TGF-B1、IL-6和IL-10含量明顯降低，而VEGF及IL-4含量無明顯改變。 2.3相關分析顯示，槲皮素作用后，Hela細胞培養(yǎng)上清對

8、人外周血淋巴細胞轉(zhuǎn)化的抑制和CD25+的表達抑制均與TGF-B1含量正相關；TL細胞殺傷的抑制分別與VEGF和IL-4表達正相關，然而槲皮素作用后Hela細胞培養(yǎng)上清對人外周血淋巴細胞CD4+CD25-的表達抑制與IL-10含量正相關，CD4+CD25+表達與5種免疫抑制分子含量無明顯相關性。 結(jié)論： 1.宮頸癌Hela細胞培養(yǎng)上清對人外周血淋巴細胞的免疫功能具有明顯抑制作用，其有可能是宮頸癌Hela細胞分泌免疫抑制分子

9、，如TGF-β1和IL-10等，CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞生成增多也可能參與了腫瘤免疫。 2.三氧化二砷和槲皮素主要通過調(diào)節(jié)免疫抑制分子TGF-β1和IL-10分泌逆轉(zhuǎn)宮頸癌Hela細胞的免疫抑制作用，這可能是兩種中藥抗腫瘤作用的機制之一。 3.三氧化二砷和槲皮素可能通過下調(diào)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞的表達，恢復CD4+T細胞抗腫瘤功能及CTL細胞殺瘤活性，達到抑制腫瘤細胞生長的效果，這可能也是兩種中藥抗腫瘤作用