淫羊藿苷協(xié)同三氧化二砷對人肝細(xì)胞肝癌的抑制作用.pdf

1、[目的]
　　肝細(xì)胞肝癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是最常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重影響著人類的健康，在我國每年肝癌的發(fā)病率約為20/10萬，其死亡率高居所有癌癥死亡率第二位。目前，最有效的治療手段為手術(shù)切除和肝移植，但療效欠佳，術(shù)后腫瘤的復(fù)發(fā)和肝內(nèi)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移發(fā)生率較高。除此之外，化學(xué)藥物治療是肝臟惡性腫瘤一種重要的治療方法，一般來講可作為不能手術(shù)切除的腫瘤及肝癌術(shù)后的輔助治療、術(shù)后復(fù)發(fā)治療的重要的補(bǔ)充

2、治療手段?；熕幬餁[瘤細(xì)胞主要是通過促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，從而起到治療腫瘤的目的。在化療過程中腫瘤細(xì)胞對化療藥物誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞凋亡具有抵抗力，某些腫瘤甚至可在化療治療后出現(xiàn)耐藥，嚴(yán)重影響化學(xué)藥物治療效果。一方面化療藥物誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，另一方面化療藥物激活腫瘤細(xì)胞內(nèi)的一系列生物信號，使得腫瘤細(xì)胞對化療藥物的抵抗能力增加。抑制和促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的各種因素之間的相互作用決定了細(xì)胞的凋亡。
　　肝細(xì)胞肝癌的腫瘤新生血管生成被認(rèn)為與HCC

3、的侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為密切相關(guān)。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(vasculaur endothelial growth factor，VEGF)是腫瘤新生血管生成中最主要的刺激因子，與HCC的侵襲、轉(zhuǎn)移和腫瘤新生血管生成密切相關(guān)，VEGF被認(rèn)為是HCC血管生成中最主要的刺激因子。Vasohibin-1是一個可以被VEGF誘導(dǎo)的血管生成負(fù)反饋抑制因子，因此研究vasohibin-1參與腫瘤新生血管生成異常疾病的發(fā)生、發(fā)展備受關(guān)注。
　　核

4、因子-κb(nuclear factor-κb，NF-κb)是一類廣泛存在的轉(zhuǎn)錄因子，與凋亡、免疫反應(yīng)有著密切的聯(lián)系。近來研究發(fā)現(xiàn)能被多種化療藥物所激活，尤其是干擾核酸生成的抗腫瘤藥物，并且通過多種機(jī)制參與了腫瘤細(xì)胞耐藥的形成，與腫瘤的化療密切相關(guān)。除此之外，還研究發(fā)現(xiàn)NF-κb與胚胎發(fā)育中的細(xì)胞凋亡也有相關(guān)性。人們逐漸認(rèn)識到腫瘤的發(fā)生，以及腫瘤細(xì)胞先天形成、后天獲得的對化療藥物的耐藥性與NF-κb所調(diào)節(jié)的細(xì)胞凋亡密切相關(guān)，即腫瘤細(xì)胞中

5、NF-κb可能與相關(guān)抑制因子表達(dá)缺失、結(jié)構(gòu)性激活等因素導(dǎo)致NF-κb過度激活。NF-κb的作用及其在實(shí)踐中的應(yīng)用成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)內(nèi)容之一。激活后的NF-kb在腫瘤細(xì)胞中主要發(fā)揮抑制腫瘤細(xì)胞凋亡的作用，并且抗調(diào)亡作用具有多樣性，在肝癌、淋巴瘤、胃癌等多種腫瘤中均已經(jīng)被證實(shí)。
　　淫羊藿苷(Icariin ICA)作為淫羊藿主要的提取物，是一種天然化合物，有抗腫瘤等多種藥理學(xué)功效。ICA作為一種常見中藥，近年來研究發(fā)現(xiàn)，ICA具有活

6、血化瘀、增強(qiáng)免疫、扶正培本且無明顯不良反應(yīng)，而且對心血管、腦血管系統(tǒng)、骨代謝、免疫系統(tǒng)及抗腫瘤治療等方面具有廣泛的藥理作用，它能抑制腫瘤細(xì)胞生長、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。本課題旨在探討NF-κb和Vasohibin-1在肝細(xì)胞肝癌中的表達(dá)情況及其在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中的作用，他們之間是否存在相關(guān)性。通過實(shí)驗(yàn)研究淫羊藿苷能否加強(qiáng)三氧化二砷在對肝細(xì)胞肝癌的治療中的抗腫瘤活性，為闡明肝癌的發(fā)病機(jī)理和提高肝癌的化療效果進(jìn)行有益的探索。
　　[方

7、法]
　　1.Vasohibin-1蛋白、NF-κb蛋白在肝細(xì)胞肝癌組織中的表達(dá):選取山東省省立醫(yī)院及濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院病理科106例肝癌組織及相應(yīng)癌旁組織，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測vasohibin-1、NF-κb的表達(dá)，分析vasohibin-1、NF-κb在HCC組織中的表達(dá)有無相關(guān)性。
　　2.通過MTT試驗(yàn)及流式細(xì)胞儀分別檢測細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡。通過熒光信號來分析ROS水平和線粒體膜電位的變化。蛋白免疫印跡檢測蛋白

8、質(zhì)的表達(dá)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測NF-κb活性。
　　[結(jié)果]
　　1.Vasohibin-1蛋白在肝癌組織中的表達(dá):免疫組化檢測結(jié)果顯示vasohibin-1蛋白在106例肝癌組織中的高表達(dá)陽率為68.90％(73/106)，癌旁組織中高表達(dá)陽性率16.04％(17/106)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，vasohibin-1在HCC中的高表達(dá)陽性率高于非腫瘤癌旁組織，二者間有顯著性差異(x2=60.55，P＜0.001)。
　　N

9、F-κb蛋白在肝癌組織中的表達(dá):免疫組化檢測結(jié)果顯示NF-κb蛋白在106例肝癌組織中的高表達(dá)陽性率為71.70％(76/106)，癌旁組織中高表達(dá)陽性率23.58(25/106)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，NF-κb在HCC中的高表達(dá)陽性率高于癌旁組織，二者間有顯著性差異(x2=49.19，P＜0.001)。
　　Vasohibin-1和NF-κB表達(dá)水平之間的相互關(guān)系:76例NF-κb高陽性表達(dá)的HCC組織中Vasohibin-1低陽性表

10、達(dá)19例，Vasohibin-1高陽性表達(dá)57例，30例NF-κb低表達(dá)陽性的HCC組織中Vasohibin-1高陽性表達(dá)16例，Vasohibin-1低陽性表達(dá)14例，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，NF-κB及Vasohibin-1在HCC中的表達(dá)無顯著性相關(guān)(x2=4.70，P＞0.05)。
　　2.淫羊藿苷在所有的肝細(xì)胞肝癌細(xì)胞組中對肝癌細(xì)胞的抑制增殖、誘導(dǎo)凋亡作用存在劑量依賴性。無論體內(nèi)實(shí)驗(yàn)還是體外實(shí)驗(yàn)，淫羊藿苷都能加強(qiáng)三氧化二砷的抗腫瘤

11、活性。淫羊藿苷抗腫瘤活性和它對三氧化二砷的加強(qiáng)作用與細(xì)胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生及NF-κb活性抑制相關(guān)。
　　[結(jié)論]
　　1.Vasohibin-1蛋白在肝癌組織中高表達(dá)，在癌旁組織中弱表達(dá)，vasohibin-1可作為臨床檢測的有重要參考價(jià)值的標(biāo)志物，對判斷肝癌發(fā)生、發(fā)展及判斷預(yù)后有重要意義;NF-κb在肝癌組織中高表達(dá)，可能與其抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖有關(guān)，但是NF-κb與Vasohibin-1蛋白在肝細(xì)胞肝癌組織中