漢黃芩苷對(duì)人肝癌細(xì)胞BEL-7402的抑制作用研究.pdf

1、肝癌是我國(guó)常見的惡性腫瘤之一，臨床治療難度大、療效差。利用藥物對(duì)細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的調(diào)控來誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡成為目前腫瘤治療的研究熱點(diǎn)。黃芩中的黃酮在體外抗腫瘤作用方面表現(xiàn)出活性，但目前國(guó)內(nèi)外尚未有關(guān)于漢黃芩苷體外抗腫瘤作用的相關(guān)研究。本實(shí)驗(yàn)研究漢黃芩苷對(duì)體外培養(yǎng)的人Bel-7402細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制及凋亡的影響，旨在探討漢黃芩苷抗腫瘤作用機(jī)制，為漢黃芩苷的藥物開發(fā)及臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 通過使用不同濃度漢黃芩苷作用于體外培養(yǎng)的Bel-7

2、402細(xì)胞，利用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)改變，收集細(xì)胞后，使用A0/EB雙染色法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞死亡情況。我們發(fā)現(xiàn)漢黃芩苷可以明顯抑制Bel-7402細(xì)胞生長(zhǎng)，熒光顯微鏡下可見細(xì)胞凋亡。使用96孔培養(yǎng)板培養(yǎng)細(xì)胞，MTT試驗(yàn)后檢測(cè)570nm吸光值，通過計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率進(jìn)一步了解漢黃芩苷作用后細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制情況，得出4 μM濃度以上的漢黃芩苷對(duì)Bel-7402細(xì)胞均有抑制作用，48小時(shí)半數(shù)抑制濃度約為8μM。通過瓊脂糖凝

3、膠電泳分析漢黃芩苷作用后的細(xì)胞DNA，與對(duì)照組相比藥物處理組可見較明顯的DNA梯狀條帶，證實(shí)處理組細(xì)胞中有典型的細(xì)胞凋亡發(fā)生。 為研究漢黃芩苷抑制Bel-7402細(xì)胞并誘導(dǎo)其凋亡的機(jī)制，采用流式細(xì)胞儀分析凋亡情況及細(xì)胞周期的改變，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡比率隨漢黃芩苷作用濃度的增加而增加，相同濃度下隨時(shí)間的延長(zhǎng)G<,0>-G<,1>期細(xì)胞比率逐漸減小，S期、G<,2>期細(xì)胞比率明顯增大，說明漢黃芩苷對(duì)細(xì)胞增長(zhǎng)的抑制作用主要在G<,2>/M期