黃芪皂苷Ⅱ和Ⅳ對人肝癌細(xì)胞BEL-7402-5-FU的耐藥逆轉(zhuǎn)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文黃芪皂苷Ⅱ和Ⅳ對人肝癌細(xì)胞BEL74025FU的耐藥逆轉(zhuǎn)作用及其機(jī)制研究姓名：王培培申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：藥理指導(dǎo)教師：許杜娟20100301安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文4價ASⅡ、ASⅣ對肝癌耐藥細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)作用，并從mdr1、Bax、Bcl2基因水平和Pgp蛋白表達(dá)量探討逆轉(zhuǎn)耐藥的作用機(jī)制。方法1.70﹪乙醇回流提取，水飽和正丁醇萃取，D101大孔吸附樹脂富集純化黃芪總苷，硅膠柱層析分離不同的皂苷組分。2.薄層色

2、譜法、高效液相－示差檢測器法分別進(jìn)行皂苷類成分的鑒定及含量測定。3.選擇人肝癌敏感細(xì)胞株BEL7402、肝癌耐藥細(xì)胞株BEL74025FU做為實(shí)驗(yàn)細(xì)胞，采用MTT法測定細(xì)胞株對三種化療藥物(5FU、ADR、MMC)的敏感性和耐藥倍數(shù)。4.MTT比色法測定(0.04，0.08，0.16，0.32，0.64)mgmL的ASⅡ及(0.04，0.08，0.16，0.32，0.64)mgmL的ASⅣ對BEL7402和BEL74025FU細(xì)胞的劑量

3、效應(yīng)曲線，并根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定逆轉(zhuǎn)耐藥劑量。5.選擇無細(xì)胞毒作用的ASⅡ、ASⅣ劑量作用BEL74025FU細(xì)胞，MTT法檢測細(xì)胞存活率，求出逆轉(zhuǎn)倍數(shù)。6.RTPCR和免疫細(xì)胞化學(xué)法分別檢測mdr1mRNA表達(dá)和Pgp蛋白表達(dá)。7.流式細(xì)胞儀檢測ASⅡ、ASⅣ對細(xì)胞內(nèi)Rho123的蓄積影響及細(xì)胞凋亡。8.采用RTPCR檢測Bax、Bcl2mRNA表達(dá)。結(jié)果1.從黃芪總苷中分離出六種化合物(ASⅠ～ASⅥ)，其中ASⅠ部分經(jīng)鑒定主要含黃

4、芪皂苷Ⅱ，含量為29.4﹪，ASⅢ部分經(jīng)鑒定主要含黃芪皂苷Ⅳ，含量為22.82﹪。其余4個部分有待于進(jìn)一步鑒定。2.BEL74025FU細(xì)胞對5FU、ADR、MMC三種化療藥物均顯示耐藥性，耐藥倍數(shù)分別為19.64，1.98，1.92。3.ASⅡ(0.04，0.08mgmL)、ASⅣ(0.04，0.08mgmL)能夠提高5FU對BEL74025FU的細(xì)胞毒作用，ASⅡ逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為1.49，1.81，ASⅣ逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為1.70，1.86。4.