miR-195對(duì)肝癌Bel-7402-5-FU細(xì)胞5-氟尿嘧啶敏感性的影響.pdf

1、目的:探討微小RNA miR-195對(duì)肝癌耐藥細(xì)胞株Bel-7402/5-FU5-氟尿嘧啶敏感性的影響以及作用機(jī)制。
　　方法:運(yùn)用miRNAs芯片技術(shù)篩選Bel-7402及Bel-7402/5-FU細(xì)胞中差異表達(dá)miRNAs;運(yùn)用靶基因預(yù)測(cè)軟件pictar并結(jié)合miRNAs芯片結(jié)果預(yù)測(cè)差異表達(dá)miRNAs可能調(diào)控的Bcl-2基因家族靶基因;miR-195真核表達(dá)質(zhì)粒載體pSilencer3.1-H1 neo/miR-195的構(gòu)建

2、;將miR-195真核表達(dá)質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染至Bel-7402/5-FU細(xì)胞;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況;Western-blot檢測(cè)細(xì)胞Bcl-2、Bcl-XL、Bax、p53蛋白表達(dá)的情況。
　　結(jié)果:miRNAs芯片結(jié)果顯示Bel-7402/5-FU及Bel-7402兩種細(xì)胞同一miRNA表達(dá)量比值大于2的高表達(dá)miRNA有miR-192和miR-194,同一miRNA表達(dá)量比值小于0.5的低表達(dá)miRNA有miR-195、miR

3、-199a、miR-200a、miR-125a等;pictar軟件預(yù)測(cè)與Bcl-2基因家族特異性作用的miRNAs有:miR-107、miR-15a、miR-16、miR-103、miR-195、miR-122等共31種,結(jié)合miRNAs芯片結(jié)果,選擇miR-195作為我們研究的miRNA;流式細(xì)胞術(shù):Bel-7402/5-FU細(xì)胞miR-195載體轉(zhuǎn)染組、陰性對(duì)照cel-miR-67轉(zhuǎn)染組、空載體轉(zhuǎn)染組及未轉(zhuǎn)染組,用406μg/ml5

4、-Fu處理24小時(shí)的上述4組細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè),Bel-7402/5-FU細(xì)胞miR-195載體轉(zhuǎn)染組凋亡率較陰性對(duì)照轉(zhuǎn)染cel-miR-67組、轉(zhuǎn)染空載體組和未轉(zhuǎn)染組增加,其凋亡率分別為:12.1±0.64％、2.5±0.53%、2.2±0.48%、1±0.52%;加藥處理24小時(shí)的凋亡率分別為26.9±0.89%、9.8±0.77%、9.2±0.78%、7.6±0.86%;Western-blot檢測(cè)結(jié)果顯示:miR-195可降低