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文檔簡介
1、目的: 進一步探討5-FU對正常人外周血T細胞介導(dǎo)免疫應(yīng)答的抑制機制及IL-12是否能夠恢復(fù)由5-FU引起的免疫抑制功能,為臨床用藥和治療提供理論依據(jù)。 實驗材料和方法: (1)首先觀察5-FU對肝癌細胞株HepG2及正常人外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)增殖和活性的影響,找出既能抑制腫瘤生長,也能抑制免疫細胞功能的5-Fu濃度,以此濃度作為實驗
2、的作用濃度。 (2)PBMCs在anti-CD3或anti-CD3+anti-CD28刺激的條件下,加入或不加入不同濃度5-FU共同培養(yǎng),利用EIASA法檢測培養(yǎng)上清中IFN-γ的水平。 (3)PBMCs預(yù)先加入或不加入5-FU共同培養(yǎng)后,再分別加入anti-CD3+anti-CD28刺激,利用流式細胞檢測技術(shù)分析T細胞亞群表達細胞因子IFN-γ和IL-2以及細胞活化分子CD25表達的變化。 (4)PBMCs加入
3、anti-CD3、anti-CD3+5-FU和上述兩組分別加入不同濃度的IL-12共培養(yǎng)于96孔平底培養(yǎng)板48 h后收集上清,ELISA法檢測IFN-γ。另外,PBMCs與anti-CD3或anti-CD3+5-FU于同樣條件下預(yù)處理24 h后再分別加入不同濃度IL-12,繼續(xù)培養(yǎng),收集上清,ELISA法檢測IFN-γ。 (5)Anti-CD3+anti-CD28、IL-12、5-FU不同配伍組合與PBMCs共培養(yǎng)后收集細胞進行
4、細胞表面和細胞內(nèi)染色。 IL-12恢復(fù)化療藥5-氟尿嘧啶(5-FU)抑制的T細胞免疫功能結(jié)果: (1)5-FU抑制肝癌細胞株HepG2的生長,同時以劑量依賴方式抑制正常人PBMCs的生長及IFN-γ的產(chǎn)生。當5-FU濃度為10μg/ml或50μg/ml時,既能抑制腫瘤細胞株的生長,也抑制免疫細胞分泌IFN-γ。 (2)T細胞亞群分析的結(jié)果表明,5-FU抑制了CD4<'+>和CD8<'+>T淋巴細胞IFN-γ和IL
5、-2的表達,同時也抑制了兩種細胞亞群細胞表面活化分子CD25的表達。 (3)5-FU預(yù)處理與否,IL-12都能在整體細胞水平上恢復(fù)T細胞產(chǎn)生IFN-γ的能力。 (4)IL-12能促進由anti.CD3+anti-CD28誘導(dǎo)的CD4<'+>和CD8<'+>T細胞IFN-γ產(chǎn)生。與anti-CD3+anti.CD28+5-FU組相比,anti-CD3+anti-CD28+5-FU+IL-12組產(chǎn)生IFN-γ的CD4<'+>
6、和CD8<'+>T細胞百分率都升高,說明IL-12能恢復(fù)由5-FU抑制后CD4<'+>和CD8<'+>T細胞產(chǎn)生IFN-γ的能力。 結(jié)論: 本研究證明了5-FU抑制腫瘤細胞生長的同時也抑制免疫細胞的應(yīng)答,以劑量依賴方式抑制正常人PBMCs IFN-γ的產(chǎn)生。5-FU抑制CD4<'+>和CD8<'+>T淋巴細胞IFN-γ和IL-2的表達,同時也抑制PBMCs的活化。當將IL-12加入到經(jīng)anti-CD3和5-FU作用的細胞
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