莪術(shù)醇聯(lián)合5-氟尿嘧啶對人胃癌SGC-7901細(xì)胞增殖、凋亡的影響.pdf

1、目的:
　　研究莪術(shù)醇(Curcumol)及5-氟尿嘧啶(5-FU)對人胃癌SGC-7901細(xì)胞增殖、凋亡的影響，并初步探討其可能的作用機(jī)制。
　　對象:
　　人胃癌SGC-7901細(xì)胞
　　方法:
　　首先，配制莪術(shù)醇的母液，把結(jié)晶體溶解在無水乙醇中，得到的母液的濃度為5mg/ml。一共設(shè)置5組莪術(shù)醇用藥組，其莪術(shù)醇的濃度分別是0μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、64μg/ml，其

2、中第1組，是溶劑對照組，是含有1％無水乙醇的1640的培養(yǎng)液。其次，設(shè)莪術(shù)醇及5-氟尿嘧啶聯(lián)合用藥組1、2、3、4組，分別為對照組(0μ g/ml)、莪術(shù)醇培養(yǎng)液組（32μg/ml）、5-氟尿嘧啶培養(yǎng)液組（5μg/ml）、莪術(shù)醇（32μg/ml）+5-氟尿嘧啶（5μg/ml）聯(lián)合培養(yǎng)液組。在正常條件下，我們培養(yǎng)SGC-7901細(xì)胞，培養(yǎng)48小時(shí)后，采用臺盼藍(lán)(Trypan blue)拒染法，檢測其活性。用莪術(shù)醇和5-氟尿嘧啶以不同濃度、

3、不同時(shí)間以及各種組合處理SGC-7901細(xì)胞后，采用噻唑藍(lán)(MTT)法，檢測細(xì)胞的增殖抑制率。采取流式細(xì)胞儀技術(shù)來檢測胃癌SGC-7901細(xì)胞的凋亡率;免疫印跡法(Western Blot)檢測Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表達(dá)水平;通過Caspase-3活性檢測試劑盒來檢測Caspase-3的酶活性的表達(dá)水平高低。
　　結(jié)果:
　　1、Trypan blue拒染實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，此胃癌細(xì)胞，符合本次實(shí)驗(yàn)的使用要求

4、。各藥物濃度培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞后，胃癌細(xì)胞的增殖抑制率與溶劑對照組細(xì)胞相比，有明顯的差異(P＜0.05)，隨著藥物濃度的增高，胃癌細(xì)胞的增殖抑制率亦越高。其中，藥物培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞48h，對細(xì)胞的生長抑制作用最為明顯。莪術(shù)醇與5-氟尿嘧啶聯(lián)合用藥組比單藥處理組的細(xì)胞增殖抑制率明顯上升(P＜0.05)。
　　2、藥物作用細(xì)胞48h后，流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示，對照組細(xì)胞凋亡率約為2.37％，單用莪術(shù)醇組為13.43％，單用5-氟尿嘧啶組為1

5、0.59％，聯(lián)合用藥組凋亡率為24.11％，提示莪術(shù)醇有促進(jìn)5-氟尿嘧啶誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞凋亡的作用(P＜0.05)。
　　3、Western Blot檢測結(jié)果表明，莪術(shù)醇及5-氟尿嘧啶作用于SGC-7901細(xì)胞48h后，均能促進(jìn)Bax蛋白的表達(dá)，抑制Bcl-2蛋白的表達(dá)，聯(lián)合用藥組對蛋白的促進(jìn)和抑制作用明顯高于單獨(dú)使用化療藥組(P＜0.05)。
　　4、Western Blot以及Caspase-3活性檢測結(jié)果表明，莪術(shù)醇和5

6、-氟尿嘧啶處理胃癌細(xì)胞48h后，均能促進(jìn)Caspase-3蛋白和酶活性的表達(dá)，聯(lián)合用藥組蛋白及酶表達(dá)水平明顯高于單獨(dú)使用化療藥組(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、莪術(shù)醇可以明顯抑制SGC-7901細(xì)胞的增殖，促進(jìn)凋亡，與5-氟尿嘧啶聯(lián)合應(yīng)用對胃癌細(xì)胞的增殖抑制及促凋亡作用更加明顯。結(jié)果表明，莪術(shù)醇能增強(qiáng)胃癌細(xì)胞對化療藥物的敏感性。
　　2、莪術(shù)醇及5-氟尿嘧啶可以通過調(diào)節(jié)凋亡蛋白bax/bcl-2的比例，激活Ca