淫羊藿苷(ICA)對胃癌細胞株SGC-7901增殖的影響.pdf

1、目的：觀察中藥提取成分淫羊藿苷(Icariin,ICA)對人胃癌細胞株(SGC-7901)增殖的影響。研究不同藥物濃度干預(yù)后，不同時間點各組胃癌細胞周期的變化，以及各組細胞的凋亡情況，探討淫羊藿苷對胃癌細胞的影響，評價其對胃癌患者的治療效果。
　　 方法：第一部分：在DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)胃癌細胞株(SGC-7901)，每隔1d～2d換1次培養(yǎng)液。培養(yǎng)2d后，細胞至對數(shù)期，用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗掉非貼壁細胞，換培養(yǎng)液傳代繼續(xù)培

2、養(yǎng)，細胞鋪滿瓶底時，收集貼壁細胞。
　　 第二部分：貼壁細胞隨機分成4組。對照組：加DMEM培養(yǎng)基及血清；ICA干預(yù)組(共3組)：加含不同濃度ICA的培養(yǎng)基及血清，培養(yǎng)12、24、36、48小時。
　　 第三部分：將對數(shù)生長期胃癌細胞用0.25％胰酶消化，用滅菌PBS稀釋離心去上清。培養(yǎng)基重懸細胞后計數(shù)，調(diào)整細胞濃度為106/mL，將細胞按每孔90μL種板，分別設(shè)立對照組和不同濃度淫羊藿苷(100mg/L,200mg/L

3、,400mg/L)誘導(dǎo)組，每孔分別設(shè)五復(fù)孔，分別在12、24、36、48h收獲。細胞用孔板離心機離心，然后去上清，0.25％胰酶消化后，每孔加90μL培養(yǎng)基重懸細胞，再加MTT20μL，并增設(shè)陰性對照，37。C孵育4小時，每孔加入0.04mol/LDMSO溶液100μL，用吸管反復(fù)吹打使接近結(jié)晶顆粒溶解后，用免疫酶標儀在490nm波長測光密度值(OD值)，計算抑制率。
　　 第四部分：將對數(shù)生長期細胞分為對照組、不同濃度ICA(

4、100,200,400mg/L)誘導(dǎo)組，共同培養(yǎng)24h后，收集細胞，然后將每組細胞分兩份。將收獲的新鮮細胞用PBS洗滌1次，80％的冰乙醇固定過液，再用PBS洗滌1次，各組細胞加100μL濃度為10mg/L的PI溶液和50μL濃度為0.1％的RnaseA溶液，室溫下避光放置30min，用流式細胞術(shù)檢測各組的細胞周期和凋亡率。
　　 結(jié)果：與對照組比較，ICA的低、中、高濃度組均對SGC-7901細胞有抑制作用，且呈一定的量效、時

5、效關(guān)系，在中濃度24h抑制作用最為顯著。在同一濃度組中，隨時間延長ICA對胃癌細胞的抑制作用逐漸增強，于24h達到高峰，后逐漸減弱。SGC-7901細胞在不同濃度ICA培養(yǎng)液中培養(yǎng)12h、24h、36h、48h后測得，三種濃度在同一作用時間內(nèi)均可使SGC-7901吸光度值(OD)降低，計算出各濃度組的抑制率，與對照組比較，均有顯著差異(p＜0.05)；中濃度組抑制率最明顯。
　　 不同濃度的ICA培養(yǎng)液溫育細胞24h后用流式細胞

6、儀分析細胞周期?？梢娕c對照組比較，G1期細胞比例升高，G2期細胞比例減少，S期細胞比例無明顯變化。在低、中、高三個不同濃度的ICA培養(yǎng)液培養(yǎng)條件下，細胞增殖周期都受到不同程度的影響，在中濃度時細胞增殖周期變化最大。各濃度組與對照組同一細胞周期比較，均有顯著差異(p＜0.05)。低、中、高(即100mg/L,200mg/L,400mg/L)三個濃度的ICA培養(yǎng)液溫育細胞24h后用流式細胞儀分析細胞凋亡。對照組凋亡率為5.46％，在低、中、