淫羊藿苷對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞內(nèi)CaSR及Survivin、Runx3基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：通過觀察淫羊藿苷(ICA)聯(lián)合鈣敏感受體（CaSR）活性改變對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞增殖的影響，及其對(duì)細(xì)胞內(nèi)CaSR及Survivin、Runx3基因表達(dá)的影響，探討ICA抗腫瘤的相關(guān)機(jī)制，為臨床應(yīng)用ICA治療胃癌提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，促進(jìn)胃癌的有效治療，并促進(jìn)中藥有效成分在抗腫瘤治療方面更好地發(fā)揮優(yōu)勢(shì)。
　　方法：體外培養(yǎng)人胃癌SGC-7901細(xì)胞
　　1．ICA及ICA聯(lián)合CaSR活性改變對(duì)SGC-7901細(xì)胞增殖的影響

2、：采用噻唑藍(lán)比色法（MTT）測(cè)定經(jīng)遞增劑量ICA（25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L）、ICA聯(lián)合CaSR激動(dòng)劑（Calindol）和抑制劑（Calhex231），作用24 h、48 h及72 h后的SGC-7901細(xì)胞增殖抑制率。
　　2．ICA聯(lián)合Calindol對(duì)SGC-7901細(xì)胞凋亡的影響：Hoechst染色法檢測(cè)ICA及ICA聯(lián)合Calindol對(duì)SGC-7901細(xì)胞作

3、用48 h后的細(xì)胞凋亡情況。
　　3．ICA聯(lián)合CaSR活性改變對(duì)SGC-7901細(xì)胞內(nèi)CaSR、Survivin、Runx3基因蛋白和mRNA表達(dá)的影響：ICA聯(lián)合Calindol、Calhex231對(duì)SGC-7901細(xì)胞作用48 h后，Western blot技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)CaSR、Survivin及Runx3基因蛋白的表達(dá)情況；RT-PCR技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)CaSR、Survivin及Runx3基因mRNA的表達(dá)情況。
　

4、　4．統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：全部實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料服從正態(tài)分布用均值（-x±S）表達(dá)，多組間比較采用方差分析，兩組間用SNK做兩兩比較；不服從正態(tài)分布采用中位數(shù)和四分位間距表達(dá)，組間比較采用秩和檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料用率表達(dá)，組間比較采用卡方檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1．MTT結(jié)果顯示不同濃度的ICA分別作用于SGC-7901細(xì)胞24 h、48 h及72 h后，均有明顯

5、的抑制增殖的作用，與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），隨著藥物濃度的增加及作用時(shí)間的延長，其作用效果越強(qiáng)，呈時(shí)間、劑量依賴性。
　　2．不論作用24 h，48 h還是72 h，ICA聯(lián)合Calindol對(duì)SGC-7901細(xì)胞的抑制增殖作用明顯高于相同濃度的ICA或Calindol單獨(dú)作用于SGC-7901細(xì)胞的效果，與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），且呈時(shí)間依賴性。
　　3．經(jīng)Hoechst33342染色后，I

6、CA聯(lián)合Calindol對(duì)SGC-7901細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡的作用明顯高于相同濃度的ICA或Calindol單獨(dú)作用于SGC-7901細(xì)胞的效果。
　　4．ICA和Calindol均能促進(jìn)SGC-7901細(xì)胞內(nèi)CaSR、Runx3蛋白和mRNA表達(dá)上調(diào)，Survivin蛋白和mRNA表達(dá)下調(diào)；二者聯(lián)合后促進(jìn)CaSR、Runx3表達(dá)上調(diào)和Survivin表達(dá)下調(diào)的作用效果明顯高于單獨(dú)作用，與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。

7、>　　結(jié)論：
　　1．ICA能夠明顯抑制SGC-7901細(xì)胞的增殖，且呈時(shí)間和劑量依賴性。
　　2．ICA與Calindol聯(lián)合作用于SGC-7901細(xì)胞，其抑制增殖的效應(yīng)明顯大于二者單獨(dú)作用于SGC-7901細(xì)胞，且呈時(shí)間依賴性。
　　3． ICA能夠明顯誘導(dǎo) SGC-7901細(xì)胞的凋亡，且 ICA與Calindol聯(lián)合作用于SGC-7901細(xì)胞后，誘導(dǎo)凋亡的作用明顯大于二者單獨(dú)作用的效果。
　　4．ICA和C