NHE1基因調(diào)控細胞內(nèi)酸堿平衡對SGC-7901胃癌細胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的:胞膜離子交換蛋白Na<'+>-H<'+>交換泵第1亞型(Na<'+>-H<'+>exchanger1,NHE1)是存在于所有真核細胞的一種跨膜蛋白,是維持細胞內(nèi)pH值(intracellular,pH,pHi)在中性或偏堿性的重要膜蛋白,是pHi調(diào)節(jié)的重要機制之一.近年來研究發(fā)現(xiàn),NHE1基因在腫瘤細胞中的表達水平顯增高,與腫瘤的發(fā)生和抗凋亡生長有密切關(guān)系.NHE1基因超表達是阻止癌細胞內(nèi)酸化,使癌細胞免遭凋亡,以維持其抗凋亡生長

2、特性的重要機制之一.該課題試圖通過基因轉(zhuǎn)染技術(shù),研究NHE1反義基因?qū)GC-7901胃癌細胞增殖、凋亡及其生物學(xué)行為的影響,探討通過使細胞內(nèi)酸化誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡治療胃癌的新方法.方法:利用亞克隆技術(shù)構(gòu)建人NHE1反義結(jié)構(gòu)基因哺乳動物真核表達質(zhì)粒,通過DOTAP脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)將反義真核表達質(zhì)粒和空載體分別轉(zhuǎn)入SGC-7901胃癌細胞中,經(jīng)聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)對轉(zhuǎn)染基因的整合鑒定后,觀察基因轉(zhuǎn)染對細胞形態(tài)學(xué)、細胞內(nèi)pH值、NHE1

3、蛋白表達、體外生長狀況、細胞周期以及雙層軟瓊脂克隆形成能力和裸鼠成瘤力的影響.結(jié)論:(1)成功構(gòu)建了NHE1反義基因哺乳動物真核表達質(zhì)粒,并成功轉(zhuǎn)染SGC-7901胃癌細胞.(2)首次發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染NHE1反義基因后,SGC-7901胃癌細胞細胞器發(fā)生數(shù)量和形態(tài)學(xué)方面的變化,胃癌細胞形態(tài)惡性程度降低.(3)轉(zhuǎn)染NHE1反義基因后,SGC-7901胃癌細胞生長速度明顯減慢,出現(xiàn)接觸抑制,呈單層生長,增殖指數(shù)降低,細胞凋亡增加,細胞周期輕度左移,