FHIT基因?qū)θ宋赴┘?xì)胞系生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的：研究FHIT基因在三種人胃癌細(xì)胞系中的表達(dá)狀況,重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染FHIT mRNA陰性表達(dá)的人胃癌細(xì)胞系MKN-45后,FHIT基因過表達(dá)。觀察轉(zhuǎn)染前后人胃癌細(xì)胞系MKN-45增殖、克隆形成能力、黏附能力、遷移能力、侵襲能力等生物學(xué)行為的變化,以期探討FHIT基因在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用及可能的機(jī)制。 方法： 1.應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)人胃癌細(xì)胞系BGC-823、MGC-803、MKN-45中FHIT基因mRNA的表達(dá)狀

2、況。 2.構(gòu)建pcDNA3.1-FHIT真核表達(dá)載體,并轉(zhuǎn)染到FHIT mRNA陰性表達(dá)人胃癌細(xì)胞系MKN-45,RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后MKN-45細(xì)胞FHIT基因mRNA表達(dá)水平改變情況。 3.四唑鹽比色法(MTT)、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察pcDNA3.1-FHIT轉(zhuǎn)染前后MKN-45細(xì)胞增殖能力的改變。 4.內(nèi)皮細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)pcDNA3.1-FHIT轉(zhuǎn)染前后MKN-45細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞黏附能力的改變。

3、 5.Millicell小室細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)pcDNA3.1-FHIT轉(zhuǎn)染前后MKN-45細(xì)胞遷移能力的改變。 6.Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)pcDNA3.1-FHIT轉(zhuǎn)染前后MKN-45細(xì)胞侵襲力的改變。 結(jié)果： 1.RT-PCR結(jié)果提示FHIT基因在人胃癌細(xì)胞系BGC-823中呈陽性表達(dá),在MGC-803、MKN-45細(xì)胞系中呈陰性表達(dá)。 2.成功構(gòu)建pcDNA3.1-FHIT真核表達(dá)質(zhì)粒。

4、 3.轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-FHIT至FHIT基因mRNA陰性表達(dá)的人胃癌細(xì)胞系MKN-45,使其FHIT基因過表達(dá)。 4.FHIT基因的過表可抑制人胃癌細(xì)胞系MKN-45的增殖和克隆形成。 5.FHIT基因的過表達(dá)可導(dǎo)RMKN-45細(xì)胞株的遷移能力明顯降低。 6.FHIT基因的過表對(duì)于MKN-45細(xì)胞株與內(nèi)皮細(xì)胞的粘附能力以及MKN-45細(xì)胞株的侵襲能力影響無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： FHI

5、T基因在不同類型人胃癌細(xì)胞系中表達(dá)各異。FHIT基因在人胃癌細(xì)胞系BGC-823中呈陽性表達(dá),在MGC-803、MKN-45細(xì)胞系中呈陰性表達(dá)。成功構(gòu)建的真核表達(dá)載體pcDNA3.1-FHIT并轉(zhuǎn)染到FHIT基因mRNA陰性表達(dá)人胃癌細(xì)胞系MKN-45,使該細(xì)胞FHIT基因過表達(dá)。FHIT基因過表達(dá)可抑制人胃癌細(xì)胞系MKN-45的增殖和克隆形成,FHIT基因的過表達(dá)致MKN-45細(xì)胞株的遷移能力也明顯降低,提示FHIT基因可能與胃癌的發(fā)