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文檔簡(jiǎn)介
1、目的構(gòu)建組織蛋白酶D(cathepsinD,CD)基因穩(wěn)定干擾的胰腺癌L3.6pl細(xì)胞系,研究CD基因沉默對(duì)L3.6pl細(xì)胞體外生物學(xué)行為的影響。
方法構(gòu)建CDshRNA慢病毒載體并感染胰腺癌L3.6pl細(xì)胞,篩選穩(wěn)定細(xì)胞株,采用Real-timePCR及WesternBlot分別檢測(cè)CDmRNA和蛋白表達(dá)水平,并與陰性對(duì)照和空白對(duì)照組L3.6pl比較。采用MTT法、Transwell小室及流式細(xì)胞學(xué)分別檢測(cè)L3.6pl、NC
2、-L3.6pl、KD-L3.6pl三組細(xì)胞細(xì)胞體外增殖、遷移和侵襲的能力及細(xì)胞周期和凋亡的情況。
結(jié)果CD慢病毒載體感染L3.6pl后,Real-timePCR提示CDmRNA表達(dá)下降95.46%,WesternBlot顯示CD蛋白表達(dá)較干擾前顯著下降。KD-L3.6pl細(xì)胞的增殖和遷移能力較對(duì)照組均明顯減弱,Matrigel侵襲能力較對(duì)照組無(wú)明顯改變;抑制CD表達(dá)可誘導(dǎo)L3.6pl細(xì)胞周期發(fā)生再分布,G1期比例上升,S期和G
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