白細(xì)胞介素27對胰腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及機(jī)制研究.pdf

1、研究背景及目的:
　　胰腺癌是一種常見的惡性腫瘤，起病隱匿，發(fā)病迅速，預(yù)后極差，除早期手術(shù)治療外，其他治療方法收效甚微。腫瘤的生物治療是腫瘤治療的新趨勢，同時也是胰腺癌綜合診治的研究熱點。研究開發(fā)能夠激活宿主的天然免疫防御機(jī)制或直接使用天然或基因工程產(chǎn)生的靶向藥物是生物治療的核心。白細(xì)胞介素27(Interleukin-27，IL-27)是來源于IL-6/IL-12細(xì)胞因子家族的異源二聚體細(xì)胞因子，其對不同類型的免疫細(xì)胞具有廣泛調(diào)

2、節(jié)作用。研究發(fā)現(xiàn)IL-27不僅可以通過調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答產(chǎn)生抗腫瘤作用，并具有直接殺傷腫瘤細(xì)胞的功能。IL-27對于機(jī)體的免疫功能具有調(diào)節(jié)作用，可以作為潛在的腫瘤免疫治療因子，然而關(guān)于IL-27對于胰腺癌的相關(guān)作用研究甚少。為了更好的了解IL-27的生物學(xué)功能及其對胰腺癌細(xì)胞的作用，本研究擬通過探討IL-27對胰腺癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為可能存在的直接和間接的影響以及可能的作用機(jī)制，為IL-27可能成為胰腺癌生物治療新靶點提供理論及實驗依據(jù)。

3、r>　　研究內(nèi)容:
　　一、檢測IL-27對多株胰腺癌細(xì)胞增殖、凋亡及遷移侵襲能力的影響。
　　二、建立巨噬細(xì)胞、胰腺癌細(xì)胞共培養(yǎng)體系，檢測IL-27是否能通過影響巨噬細(xì)胞干預(yù)胰腺癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。
　　研究方法:
　　一、利用Real-time PCR及Western blot技術(shù)檢測多株胰腺癌細(xì)胞中IL-27特異性受體WSX-1的表達(dá)情況。IL-27直接作用于胰腺癌細(xì)胞后，CCK-8法檢測胰腺癌細(xì)胞增殖能力

4、，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期及凋亡情況，利用Transwell法檢測胰腺癌的遷移、侵襲能力。
　　二、采用PMA將人組織淋巴瘤細(xì)胞株U937細(xì)胞誘導(dǎo)為巨噬細(xì)胞(Mψ)，流式細(xì)胞檢測巨噬細(xì)胞標(biāo)志物CD68分子的表達(dá)情況。采用IL-4將Mψ誘導(dǎo)為M2型巨噬細(xì)胞，Real-time PCR檢測M1型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物CD86、IL-12p40，M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物CD206的表達(dá)情況，驗證M2型巨噬細(xì)胞是否誘導(dǎo)成功。IL-27刺激M2型巨噬細(xì)胞

5、，Real-time PCR檢測CD86、IL-12p40、CD206的表達(dá)，觀察IL-27對于M2型巨噬細(xì)胞表型的影響。建立M2型巨噬細(xì)胞/胰腺癌細(xì)胞共培養(yǎng)體系，加入IL-27進(jìn)行刺激，CCK-8檢測胰腺癌細(xì)胞增殖能力的變化，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期及凋亡情況，Western blot檢測細(xì)胞周期及凋亡相關(guān)蛋白的變化。利用Transwell法檢測胰腺癌的遷移、侵襲能力改變。Western blot檢測侵襲相關(guān)蛋白，探索可能的作用機(jī)制。<

6、br>　　結(jié)果:
　　一、多株胰腺癌細(xì)胞內(nèi)WSX-1的表達(dá)水平顯著低于脾組織及U937細(xì)胞。IL-27對胰腺癌細(xì)胞的增殖能力、周期、凋亡、遷移及侵襲能力無明顯的直接作用。
　　二、PMA誘導(dǎo)的U937細(xì)胞經(jīng)流式檢測CD68分子的表達(dá)顯著升高，說明巨噬細(xì)胞(Mψ)誘導(dǎo)成功。IL-4誘導(dǎo)Mψ為M2型巨噬細(xì)胞后，M2型巨噬細(xì)胞的CD86、IL-12p40顯著低于Mψ，而CD206顯著高于Mψ，提示M2型巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)成功。M2型巨噬

7、細(xì)胞的IL-27特異性受體WSX-1的表達(dá)水平也顯著高于Mψ。IL-27刺激M2型巨噬細(xì)胞后，CD86、IL-12p40表達(dá)顯著升高，CD206表達(dá)顯著降低，提示IL-27可能誘導(dǎo)M2型巨噬細(xì)胞向M1型轉(zhuǎn)化。在M2型巨噬細(xì)胞/胰腺癌細(xì)胞共培養(yǎng)體系中加入IL-27后，胰腺癌細(xì)胞的增殖能力、遷移及侵襲能力顯著下降，吉西他濱誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡程度顯著上升。Western blot顯示，在共培養(yǎng)體系中加入IL-27后，胰腺癌細(xì)胞的細(xì)胞周期相關(guān)蛋白C

8、DK4、Cyclin D1表達(dá)下降，凋亡相關(guān)蛋白Cleaved Caspase-9顯著上調(diào)，侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白p-STAT3，JAK2，vimentin顯著下調(diào)。
　　結(jié)論:
　　IL-27特異性受體WSX-1在胰腺癌細(xì)胞株內(nèi)表達(dá)水平均較低，IL-27無明顯的直接抑制胰腺癌細(xì)胞的作用。U937可以在體外誘導(dǎo)為巨噬細(xì)胞，利用共培養(yǎng)體系可以研究巨噬細(xì)胞與胰腺癌細(xì)胞的相互作用，IL-27可以在體外將M2型巨噬細(xì)胞向M1型轉(zhuǎn)化，從而間