MiR-1285對胰腺癌細胞惡性生物學行為的影響及作用機制.pdf

1、胰腺癌早期診斷困難、惡性程度高，是預后最差的惡性腫瘤之一，5年生存率低于7％。MiRNAs因可同時參與腫瘤的增殖、凋亡、耐藥及侵襲等多個功能通路的調控而受到廣泛關注。miR-1285屬于miR-612/1285/3187-5p簇中的一員，目前只有在肝癌和腎細胞腎癌中有所報道，但其在胰腺癌中的調控機制仍不明確，因此我們將miR-1285作為本研究的研究對象，深入研究其對胰腺癌增殖、周期、化療敏感性、侵襲、遷移、凋亡等惡性生物學行為的影響，

2、并尋找其靶基因，探索其調控機制。
　　YAP1蛋白是Hippo信號通路的主要效應因子之一，近兩年來大量研究證實其在多種惡性腫瘤中均發(fā)揮促癌作用。
　　目的:
　　1.明確miR-1285對胰腺癌細胞株增殖、周期、化療敏感性、侵襲、遷移、凋亡等表型的調控作用;
　　2.明確miR-1285的靶基因;
　　3.初步探索miR-1285及靶基因的下游信號通路。
　　方法:
　　本研究首先通過實時定量P

3、CR（探針法）檢測檢測miR-1285在各細胞系中的表達量，并選取細胞株作為研究對象。隨后，通過脂質體瞬時轉染法改變細胞內源性miR-1285的表達后，采用CCK-8細胞增殖實驗檢測miR-1285對胰腺癌細胞增殖能力和化療敏感性的影響，采用PI單標記流式細胞術檢測細胞周期，采用transwell法檢測細胞遷移和侵襲能力，采用AnnexinⅤ/PI雙標記流式細胞術檢測細胞凋亡，驗證miR-1285對胰腺癌細胞系惡性生物學行為的影響。隨后

4、，通過生物信息學數(shù)據(jù)庫預測miR-1285的靶基因，將多個數(shù)據(jù)庫預測到的結果進行比對，并實時定量PCR（染料法）和western blot法分別檢測靶基因mRNA和蛋白的表達，同時進一步驗證miR-1285-YAP1的下游效應蛋白的表達水平。
　　結果:
　　1.MiR-1285在胰腺癌耐藥株中較親本株低表達;
　　2.體外試驗中，miR-1285可顯著抑制胰腺癌細胞增殖，抑制胰腺癌細胞G1→S期轉化，增加吉西他濱化療

5、敏感性，抑制細胞遷移和侵襲能力，促進胰腺癌細胞凋亡;
　　3.MiR-1285的靶基因為YAP1，可能通過抑制YAP1 mRNA翻譯的途徑抑制YAP1蛋白表達;
　　4.MiR-1285-YAP1下游通路蛋白包括，EGFR、β-catenin、Bim、PTEN等。結論:
　　1.MiR-1285通過下調YAP1蛋白表達，在胰腺癌細胞株中發(fā)揮抑癌作用;
　　2.EGFR、β-catenin、Bim、PTEN等蛋白參