HIF-1α、VEGF對(duì)胰腺癌生物學(xué)行為與患者預(yù)后的影響.pdf

1、第一部分 HIF-1ɑ、VEGF及受體在胰腺癌中的表達(dá)與其對(duì)患者預(yù)后的影響 目的：探討RNA干擾沉默VEGF基因?qū)θ艘认侔┘?xì)胞BxPC-3誘導(dǎo)血管新生及細(xì)胞增殖能力的抑制作用。 方法：設(shè)計(jì)合成VEGF-siRNA片段，構(gòu)建慢病毒載體，在體外將siRNA轉(zhuǎn)染BxPC-3細(xì)胞。以實(shí)時(shí)定量PCR、Western blot法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)VEGF mRNA與蛋白表達(dá)情況，以Annexin V-FITC、JC-1標(biāo)記并用流式細(xì)胞檢測(cè)細(xì)

2、胞凋亡情況，MTT法檢測(cè)各組存活細(xì)胞數(shù)量變化，LDH法檢測(cè)各組細(xì)胞受損情況。裸鼠成瘤7天后，瘤周注射VEGF-siRNA慢病毒，與對(duì)照比較移植瘤體積變化，并以免疫組化觀察移植瘤內(nèi)VEGF表達(dá)情況。 結(jié)果：VEGF-siRNA轉(zhuǎn)染BxPC-3細(xì)胞后，細(xì)胞VEGF mRNA轉(zhuǎn)錄水平下降52％、蛋白表達(dá)水平下降70％。流式細(xì)胞顯示，轉(zhuǎn)染VEGF-siRNA的細(xì)胞凋亡明顯增加。MTT、LDH實(shí)驗(yàn)顯示，感染后細(xì)胞存活能力下降、細(xì)胞膜損傷嚴(yán)

3、重。成瘤實(shí)驗(yàn)中，VEGF-siRNA治療組成瘤體積明顯小于對(duì)照組，治療組平均體積為188.33±17.33mm3，對(duì)照組平均體積為301.62±21.30 mm3（P<0.05）。與對(duì)照組相比，治療組裸鼠移植瘤切片免疫組化證實(shí)VEGF表達(dá)水平明顯降低。 結(jié)論：利用VEGF-siRNA沉默VEGF基因可有效抑制胰腺癌細(xì)胞合成、表達(dá)VEGF，以此促進(jìn)細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤生長(zhǎng)。 第二部分RNA干擾沉默VEGF基因?qū)σ认侔〣xPC

4、-3生物學(xué)行為的影響 目的：探討胰腺癌中低氧誘導(dǎo)因子-1ɑ（HIF-1ɑ）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、VEGF受體1（VEGFR1/Flt-1）、受體2（VEGFR2/Flk-1）對(duì)胰腺癌微血管密度（MVD）的影響，以及這些蛋白的表達(dá)與根治性手術(shù)后胰腺癌患者預(yù)后的關(guān)系。 方法：收集5年來(lái)我院50例行胰十二指腸根治術(shù)的胰腺癌患者蠟塊病理標(biāo)本，用免疫組化法測(cè)HIF-1ɑ、VEGF、VEGFR1、VEGFR2的表達(dá)。以CD

5、34單克隆抗體顯示腫瘤內(nèi)皮細(xì)胞，計(jì)算腫瘤內(nèi)MVD，15例陰性胰腺切緣作為對(duì)照組。電話隨訪患者術(shù)后生存期，研究HIF-1ɑ、VEGF及受體VEGFR1、VEGFR2在胰腺癌中的表達(dá)與其對(duì)預(yù)后的影響。 結(jié)果：去除5位因并發(fā)癥圍手術(shù)期死亡患者，共隨訪45人，隨訪率為100％。胰腺癌組織HIF-1α、VEGF及受體R1、R2高表達(dá)，陽(yáng)性率分別為82％、84％、80％和84％，明顯高于對(duì)照組（P<0.05）。腫瘤MVD明顯高于對(duì)照組（P<

6、0.0001）。癌組織中，HIF-1α表達(dá)與VEGF、VEGFR1、VEGFR2表達(dá)正相關(guān)（P<0.05）。VEGF與VEGFR1、VEGFR2表達(dá)正相關(guān)（P<0.05）。VEGF、VEGFR1與VEGFR2表達(dá)與腫瘤MVD正相關(guān)（P<0.05）。HIF-1α與腫瘤組織分化及患者預(yù)后負(fù)相關(guān)，VEGF、VEGFR1、VEGFR2、MVD與患者預(yù)后負(fù)相關(guān)（P<0.05）。 結(jié)論：胰腺癌中HIF-1α影響腫瘤分化，并能促進(jìn)VEGF、V